Luận văn Tìm hiểu thành phần hóa học của một số cây thuộc chi hedyotis mọc ở Việt Nam và điều chế một số dẫn xuất thioflavon từ các flavon cô lập được

àu hydro vôùi carbon carbonyl taïi C-4 cuûa hôïp chaát flavon. Ngoaøi ra, phoå 1H-NMR khoâng coù muõi taïi 3,9 -3,3 ppm, cho thaáy trong hôïp chaát NIGRI-CLO D khoâng coù chöùa caùc nhoùm theá –OCH3. Phoå 1H-NMR coù ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc taïi 7,69 ppm (1H, dd, J = 8,0, 8,5 Hz, H-7) vaø 6,82 ppm (1H, d, J = 8,0 Hz, H-6) laø 2 proton voøng thôm gheùp caëp ôû vò trí orto vôùi nhau treân voøng A cuûa khung flavon. Ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc taïi dppm 7,21 (1H, d, J = 8,5 Hz) laø muõi cuûa H-8 gheùp caëp ôû vò trí orto vôùi H-7. Phoå 1H-NMR coù muõi taïi dppm 8,11 (1H, t, J = 8,5 Hz, H-2', H-6') vaø 7,66- 7,56 (3H, m, H-3', H-4', H-5') ñaây laø 5 proton voøng thôm C cuûa khung flavon. Ngoaøi ra, muõi taïi 7,11 (1H, s, H-3) laø proton H-3 cuûa voøng B. Ñieàu naøy cho thaáy, ngoaøi nhoùm –OH gaén treân C5, hôïp chaát khoâng mang nhoùm theá naøo khaùc. Phoå 13C-NMR cho thaáy hôïp chaát coù 15 carbon, trong ñoù 1 carbon carbonyl (183,2, 1C, C=O, C-4) vaø 14 carbon olefin ôû vuøng tröôøng thaáp 164-105 ppm. Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 98 So saùnh soá lieäu phoå 13C-NMR vôùi hôïp chaát chuaån primuletin[95] trình baøy trong baûng 3.17 cho thaáy coù söï töông hôïp, do ñoù chuùng toâi ñeà nghò caáu truùc cuûa hôïp chaát NIGRI-CLO D laø primuletin. OOH O 4' 3' 2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 5 6 7 8 9 Primuletin (5-Hydroxyflavon) 1 (NIGRI-CLO D) Baûng 3.17: Soá lieäu phoå NMR cuûa NIGRI-CLO D so saùnh vôùi primuletin[95] 3.1.3.7. Khaûo saùt caáu truùc hoùa hoïc cuûa hôïp chaát NIGRI-EA A Hôïp chaát NIGRI-EA A thu ñöôïc töø cao etyl acetat, coù daïng boät maøu vaøng vôùi nhöõng ñaëc ñieåm sau : * Ñieåm noùng chaûy : 283–2850C (Keát tinh trong metanol). * Phoå ESI, MS (+), (phuï luïc 64): m/z = 254,9 [M+H]+ * Phoå 1H-NMR, DMSO, (phuï luïc 65), dppm: 12,81 (1H, s, OH-5); 10,88 (1H, s, NIGRI-CLO D (DMSO) Primuletin (DMSO) N0 DEPT dH (J tính baèng Hz) dC HMBC (H " C) dC 2 >C= 164,1 164,1 3 =CH- 7,11 (1H, s) 105,6 C1', C2, C4, C10 105,7 4 >C=O 183,2 183,2 5 =C< 159,8 159,8 6 =CH- 6,82 (1H, d, 8,0) 111,0 C5, C7, C8, C10 111,0 7 =CH- 7,69 (1H, dd, 8,0; 8,5) 135,9 C5, C6, C8, C9 135,9 8 =CH- 7,21 (1H, d, 8,5) 107,5 C6, C7, C9, C10 107,5 9 >C= 155,9 155,9 10 >C= 110,1 110,1 1' >C= 130,5 130,5 2', 6' =CH- 8,11 (1H, t, 8,5) 126,6 C2, C1', C2', C6' 126,6 3', 5' =CH- 7,66 – 7,56, m 129,1 129,2 4' =CH- 7,66 – 7,56, m 132,3 132,3 C5-OH 12,65 (1H, s) C5, C6, C10 Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 99 OH-7); 8,04 (2H, d, J = 9,5 Hz, H-2', H-6'); 8,04 (3H, m, H-3', H-4', H-5'); 6,93 (1H, s, H-3); 6,50 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8) vaø 6,22 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6). * Phoå 13C-NMR keát hôïp DEPT-NMR (phuï luïc 66, 67), DMSO: Phoå ñoà cho thaáy coù 15 carbon vôùi ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc ñöôïc trình baøy trong baûng 3.18. * Phoå HSQC vaø HMBC, DMSO, (phuï luïc 68, 69): ñöôïc trình baøy ôû baûng 3.18. v Bieän luaän caáu truùc Hôïp chaát coù maøu vaøng töï nhieân neân NIGRI-EA A coù theå laø moät flavon. Phoå 1H-NMR cho muõi taïi 12,81 ppm laø ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc ñaëc tröng cuûa nhoùm –OH taïi C-5 taïo lieân keát caàu hydro vôùi carbon carbonyl taïi C-4 cuûa hôïp chaát flavon. Ngoaøi ra, phoå 1H-NMR khoâng coù muõi taïi 3,9 – 3,3 neân hôïp chaát khoâng coù chöùa nhoùm metoxy. Muõi taïi dppm 6,40 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8) vaø 6,20 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6) laø 2 proton voøng thôm gheùp caëp ôû vò trí meta vôùi nhau cuûa voøng A cuûa khung flavon. Ñieàu naøy cho thaáy, ngoaøi nhoùm –OH gaén treân C5, hôïp chaát coøn coù mang theâm 1 nhoùm –OH khaùc (10,88, 1H, OH-7) gaén treân C7. Phoå 1H-NMR cho muõi taïi dppm 8,04 (2H, d, J= 9,5 Hz, H-2', H-6'), 7,66- 7,56 (3H, m, H-3', H-4', H-5') ñaây laø 5 proton voøng thôm C cuûa khung flavon; muõi taïi 6,94 (1H, s, H-3) laø proton H-3 cuûa voøng B. Ñieàu naày cho thaáy, ngoaøi 2 nhoùm –OH gaén treân C5 vaø C7, hôïp chaát khoâng mang nhoùm theá naøo khaùc. Phoå 13C-NMR cho thaáy hôïp chaát coù 15 carbon, trong ñoù coù 1 carbon carbonyl taïi 181,8 (C-4) vaø 14 carbon olefin ôû vuøng tröôøng thaáp 164-94 ppm. So saùnh soá lieäu phoå 13C-NMR vôùi hôïp chaát chrysin[51,95] trình baøy trong baûng 3.18 cho thaáy coù söï töông hôïp, do ñoù chuùng toâi ñeà nghò caáu truùc cuûa hôïp chaát NIGRI-EA A laø chrysin. OOH O 4' 3' 2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 5 6 7 8 9 1 Chrysin (5,7-Dihydroxyflavon) HO (NIGRI-EA A) Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 100 Baûng 3.18: Soá lieäu phoå NMR cuûa NIGRI-EA A so saùnh vôùi chrysin.[51,95] NIGRI-EA A (DMSO) Chrysin (DMSO) N0 DEPT dH (J tính baèng Hz) dC HMBC (H " C) dC 2 >C= 163,1 163,2 3 =CH- 6,93 (1H, s) 105,1 C1', C2, C4, C10 105,2 4 >C=O 181,8 181,8 5 =C< 161,4 161,5 6 =CH- 6,22 (1H, d, 2,0) 98,9 C5, C7, C8, C10 99,0 7 =C< 164,4 164,4 8 =CH- 6,50 (1H, d, 2,0) 94,1 C6, C7, C9, C10 94,1 9 >C= 157,4 157,5 10 >C= 103,9 103,9 1' >C= 130,7 130,7 2', 6' =CH- 8,04 (1H, d, 9,5) 126,3 C2, C1', C2', C6' 126,4 3', 5' =CH- 8,03, m 129,1 129,1 4' =CH- 8,03, m 131,9 131,9 C5-OH 12,81 (1H, s) C5, C6, C10 C7-OH 10,88 (1H, s) 3.1.3.8. Khaûo saùt caáu truùc hoùa hoïc cuûa hôïp chaát NIGRI-EA B Hôïp chaát NIGRI-EA B thu ñöôïc töø cao etyl acetat, coù daïng boät maøu vaøng vôùi nhöõng ñaëc ñieåm sau : * Ñieåm noùng chaûy : 300–3030C (Keát tinh trong metanol). * Phoå 1H-NMR, CD3OD, (phuï luïc 70), dppm: 7,38 (2H, m, H-2', H-6'); 6,91 (1H, d, J = 9,0 Hz, H-5'); 6,54 (1H, s, H-3), 6,44 (1H, d, J = 1,0 Hz, H-8) vaø 6,22 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-6). * Phoå 13C-NMR keát hôïp DEPT, (phuï luïc 71, 72), CD3OD: Phoå ñoà cho thaáy coù 15 carbon vôùi ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc ñöôïc trình baøy trong baûng 3.19. * Phoå HSQC vaø HMBC, CD3OD, (phuï luïc 73, 74): ñöôïc trình baøy ôû baûng 3.19. Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 101 v Bieän luaän caáu truùc Hôïp chaát coù maøu vaøng töï nhieân neân NIGRI-EA B coù theå laø moät flavon. Phoå 1H-NMR khoâng cho caùc muõi taïi 3,9 – 3,3 ppm neân hôïp chaát khoâng coù chöùa nhoùm theá metoxy. Muõi taïi 6,44 (1H, d, J = 1,0 Hz, H-8) vaø 6,22 ppm (1H, d, J = 1,5 Hz, H-6) laø 2 proton voøng thôm gheùp caëp ôû vò trí meta vôùi nhau cuûa voøng A cuûa khung flavon. Ñieàu naøy phuø hôïp vôùi 2 nhoùm –OH gaén treân C-5 vaø C7. Phoå 1H-NMR cho muõi taïi dppm 6,91 (1H, d, J = 9,0 Hz, H-5') vaø 7,38 (2H, m, H-2', H-6') laø 3 proton voøng thôm treân voøng C cuûa khung flavon. Phoå HMBC vaø HSQC xaùc ñònh vò trí cuûa caùc proton naøy ñöôïc gaén taïi caùc vò trí C-5', C-2' vaø C-6'. Ñieàu naøy phuø hôïp vôùi hai nhoùm –OH gaén treân C3' vaø C4'. Ngoaøi ra, phoå 1H-NMR cho ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc taïi dppm 6,54 (1H, s, H-3) laø proton cuûa H-3 treân voøng B cuûa khung flavon. Phoå 13C- keát hôïp DEPT-NMR cho thaáy coù 15 carbon, trong ñoù 1 carbon carbonyl taïi 183,8 (C-4) vaø 14 carbon olefin ôû vuøng tröôøng thaáp 166-95 ppm. So saùnh soá lieäu phoå 13C-NMR vôùi hôïp chaát luteolin[51,69] trình baøy trong baûng 3.19 cho thaáy coù söï töông hôïp, do ñoù chuùng toâi ñeà nghò caáu truùc cuûa hôïp chaát NIGRI-EA B laø luteolin. OOH O 4' 3' 2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 5 6 7 8 9 1 HO Luteolin (5,7,3',4'-Tetrahydroxyflavon) OH OH (NIGRI-EA B) 3.1.3.9. Khaûo saùt caáu truùc hoùa hoïc cuûa hôïp chaát NIGRI-EA C Hôïp chaát NIGRI-EA C thu ñöôïc töø cao etyl acetat, coù daïng tinh theå hình kim maøu vaøng nhaït vôùi nhöõng ñaëc ñieåm sau : * Ñieåm noùng chaûy : 215–2160C (Keát tinh trong metanol). Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 102 Baûng 3.19: Soá lieäu phoå NMR cuûa NIGRI-EA B so saùnh vôùi luteolin[51,69] NIGRI-EA B (CD3OD) Luteolin (DMSO) N0 DEPT dH (J tính baèng Hz) dC HMBC (H " C) dC 2 >C= 166,3 163,9 3 =CH- 6,54 (1H, s) 103,9 C1', C2, C4, C10 102,5 4 >C=O 183,9 182,5 5 =C< 163,2 161,8 6 =CH- 6,22 (1H, d, 1,5) 100,1 C5, C7, C8, C10 98,7 7 =C< 165,9 164,8 8 =CH- 6,44 (1H, d, 1,0) 95,1 C6, C7, C9, C10 93,6 9 >C= 159,4 158,0 10 >C= 105,3 103,9 1' >C= 123,7 122,3 2' =CH- 7,38 (2H, m) 114,2 C2, C1', C6' 112,8 3' =C< 147,1 145,6 4' =C< 150,9 149,6 5' =CH- 6,91 (1H, d, 9,0) 116,7 C2, C1', C6' 115,4 6' =CH- 7,38 (2H, m) 120,3 C2, C1', C6' 118,9 * Phoå MS (phuï luïc 75): coù pic ion phaân töû m/z = 285. * Phoå 1H-NMR, DMSO, (phuï luïc 76), dppm: 12,59 (1H, s, OH-5); 10,87 (1H, s, OH-7); 8,34 (1H, s, H-2); 7,49 (2H, d, J = 9,0 Hz, H-2', H-6'); 6,99 (2H, d, J = 9,0 Hz, H-3', H-5'); 6,23 (1H, d, J = 2,5 Hz, H-6); 3,78 (3H, s, OCH3-4'). * Phoå 13C-NMR keát hôïp DEPT (phuï luïc 77, 78), DMSO, dppm: Phoå ñoà cho thaáy coù 16 carbon vôùi ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc ñöôïc trình baøy trong baûng 3.20. * Phoå HSQC vaø HMBC (phuï luïc 79, 80): ñöôïc trình baøy trong baûng 3.20. v Bieän luaän caáu truùc Phoå 1H-NMR coù muõi taïi dppm 12,59 laø ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc ñaëc tröng cuûa nhoùm –OH taïi C-5 taïo lieân keát caàu hydro vôùi carbon carbonyl taïi C-4 cuûa flavon. Phoå 1H-NMR cho muõi taïi 3,78 (3H, s,-OCH3) neân hôïp chaát coù chöùa 1 nhoùm theá -OCH3. Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 103 Phoå 1H-NMR cho muõi taïi dppm 6,38 (1H, d, J = 2,5 Hz, H-8) vaø 6,23 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6) laø 2 proton voøng thôm gheùp caëp ôû vò trí meta vôùi nhau cuûa voøng A cuûa khung flavon. Ñieàu naøy cho thaáy, ngoaøi nhoùm theá –OH taïi C5, hôïp chaát coøn coù mang theâm 1 nhoùm –OH khaùc (10,87, 1H, OH-7) gaén treân C7. Phoå 1H-NMR coù ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc taïi dppm 7,49 (2H, d, J= 9,0 Hz, H-2', H-6') vaø 6,99 (2H, d, J= 9,0 Hz, H-3', H-5') laø muõi cuûa proton voøng benzen mang 2 nhoùm theá ôû vò trí para cuûa voøng C cuûa khung flavon. Ngoaøi ra, treân phoå HMBC, proton cuûa nhoùm metoxy taïi 3,78 (3H, s,-OCH3) cho töông quan vôùi C-4' (159,12). Ñieàu naøy phuø hôïp vôùi nhoùm -OCH3 gaén treân C-4'. Treân phoå HMBC, proton taïi dppm 8,34 (1H, s) cho töông quan 2J vaø 3J vôùi caùc carbon taïi dppm 180,0 (C-4), 157,5 (C-9), 122,9 (C-3) vaø 121,9 (C-1'). Ñoàng thôøi, treân phoå HSQC, proton naøy gaén tröïc tieáp vôùi carbon taïi 154,1 (C-2). Ñieàu naøy cho thaáy NIGRI-EA C laø moät isoflavon. Phoå 13C-NMR keát hôïp vôùi DEPT-NMR cho thaáy hôïp chaát coù 16 carbon, trong ñoù 1 carbon carbonyl (180,0, 1C, C=O, C-4), 1 carbon metoxy (55,2, 1C, OCH3, C-4') vaø 14 carbon olefin ôû vuøng tröôøng thaáp 164-93 ppm. So saùnh soá lieäu phoå 13C-NMR vôùi hôïp chaát biochanin A[58] trình baøy trong baûng 3.20 cho thaáy coù söï töông hôïp, do ñoù chuùng toâi ñeà nghò caáu truùc cuûa hôïp chaát NIGRI-EA C laø biochanin A. OOH O 4' 3'2'1' 5' 6' 3 2 4 10 5 6 7 8 9 1 HO Biochanin A (5,7-Dihydroxy-4'-metoxyisoflavon) OMe (NIGRI-EA C) 3.1.3.10. Khaûo saùt caáu truùc hoùa hoïc cuûa hôïp chaát NIGRI-EA D Hôïp chaát NIGRI-EA D thu ñöôïc töø cao metanol, coù daïng tinh theå hình kim khoâng maøu, vôùi nhöõng ñaëc ñieåm nhö sau: * Ñieåm noùng chaûy: 199–2010C (Keát tinh trong metanol). Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 104 Baûng 3.20: Soá lieäu phoå NMR cuûa NIGRI-EA C so saùnh vôùi biochanin A[58] NIGRI-EA C (DMSO) Biochanin A (DMSO) N0 DEPT dH (J baèng Hz) dC HMBC (H " C) dC 2 >CH- 8,34 (1H, s) 154,2 C1', C3, C4, C9 154,3 3 >C= 122,9 121,9 4 >C=O 180,2 180,1 5 =C< 161,9 161,9 6 =CH- 6,23 (1H, d, 2,0) 98,9 C5, C7, C8, C10 99,0 7 =C< 164,3 164,3 8 =CH- 6,38 (1H, d, 2,5 ) 93,7 C6, C7, C9, C10 93,7 9 >C= 157,6 157,6 10 >C= 104,4 104,4 1' >C= 121,9 122,9 2', 6' =CH- 7,49 (2H, d, 9,0 ) 130,1 C3, C1', C3', C2', C6' 130,1 3', 5' =CH- 6,99 (1H, d, 9,0 ) 113,7 C1', C2', C4', C6' 113,6 4' =C< 159,1 159,2 -OCH3 -CH3 3,78 (3H, s) 55,1 C-4' 55,2 C5-OH 12,59 (1H, s) C5, C6, C10 C7-OH 10,87 (1H, s) C6, C7, C8 * Phoå IR (KBr), γcm-1: 3430 (O-H); 1658 (C=C); 1035 (C-O). * Phoå ESI, MS (+) (phuï luïc 81): m / z = 273,3 [M+H]+ * Phoå 1H–NMR, DMSO, (phuï luïc 82), dppm : 8,98 (1H, s, OH-4); 6,86 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-2, H-6); 6,65 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-3, H-5); 5,20 (1H, d, J=5,5 Hz, OH-2'); 4,99 (1H, d, J=4,5 Hz, OH-3'); 4,94 (1H, d, J=5,5 Hz, OH-4'); 4,63 (1H, d, J= 7,5 Hz; H-1'); 4,52 (1H, dd, J= 6,0; 6,0 Hz, OH-6'); 3,68 (1H, ddd, J= 2,0; 5,0; 10,0 Hz, H-6'a); 3,45 (1H, ddd, J= 6,0; 6,0; 10,0 Hz, OH-5'); 3,23 (1H, m, H-6'b); 3,22 (1H, dd, J= 4,0; 8,0 Hz, H-3'); 3,17 (1H, m, H-2'); 3,13 (1H, m, H-4'). * Phoå 13C–NMR keát hôïp DEPT, (phuï luïc 83, 84), DMSO: Phoå ñoà cho thaáy coù 12 carbon vôùi ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc ñöôïc trình baøy trong baûng 3.21. Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 105 * Phoå HSQC vaø HMBC (phuï luïc 85, 86): ñöôïc trình baøy trong baûng 3.21. v Bieän luaän caáu truùc Phoå 1H-NMR cho muõi taïi dppm 6,86 (2H, d, J= 8,5 Hz, H-2, H-6) vaø 6,65 (2H, d, J= 8,5 Hz, H-3, H-5) laø caùc ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc cuûa proton voøng benzen coù mang 2 nhoùm theá ôû vò trí para. Muõi taïi dppm 8,98 (1H, s) laø proton cuûa nhoùm –OH gaén vaøo voøng benzen taïi vò trí C-4. Ñieàu naøy ñöôïc khaúng ñònh khi phoå HMBC cho thaáy proton cuûa –OH naøy coù töông quan 2J vaø 3J vôùi caùc carbon taïi dppm 152,2 (1C, >C=, C-4) vaø 115,5 (2C, -CH=, C-3, C5). Phoå 1H-NMR coøn cho muõi taïi dppm 4,63 (1H, d, J= 7,5 Hz) töông öùng vôùi H-1', gheùp caëp vôùi H-2', laø muõi cuûa Ha cuûa C anomer cuûa ñöôøng. Phoå HMBC cho thaáy proton anomer naøy coù töông quan 2-3 noái vôùi carbon voøng benzen taïi dppm 150,4 (1C, >C=, C-1). Nhö vaäy, phaàn ñöôøng gaén vaøo voøng benzen taïi C-1. Phoå 13C-NMR keát hôïp vôùi DEPT-NMR cho thaáy coù 12 carbon, trong ñoù coù 6 carbon cuûa voøng thôm benzen taïi dppm 152-115, 1 carbon anomer cuûa ñöôøng taïi dppm 101,8 (C1') vaø 5 carbon mang nhoùm OH coøn laïi cuûa ñöôøng. So saùnh soá lieäu phoå 13C-NMR vôùi hôïp chaát arbutin[30] trình baøy trong baûng 3.21 cho thaáy coù söï töông hôïp, do ñoù chuùng toâi ñeà nghò caáu truùc cuûa hôïp chaát NIGRI-EA D laø arbutin. OH Arbutin (1-O-p-Hydroxybenzen-b -D-glucopyranosid) O HO HO OH OH 1' 2' 3' 4' 5' 6' O H 1 2 3 4 5 6 (NIGRI-EA D) Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 106 Baûng 3.21: Soá lieäu phoå NMR cuûa NIGRI-EA D so saùnh vôùi arbutin[30] NIGRI-EA D (DMSO) Arbutin (DMSO) N0 DEPT dH (J tính baèng Hz) dC HMBC (H"C) dC 1 >C< 150,4 150,6 2, 6 >CH- 6,86 (1H, d, 8,5) 117,7 C1, C2, C4, C6 117,9 3, 5 >CH- 6,65 (1H, d, 8,5) 115,5 C1, C3, C4, C5 115,8 4 >C< 152,2 152,4 1' O-CH-O 4,63 (1H, d, 7,5) 101,8 C1, C3' 101,9 2' >CH-OH 3,17 (1H, m) 73,3 73,6 3' >CH-OH 3,22 (1H,dd, 4; 8) 76,6 77,1 4' >CH-OH 3,15 (1H, m) 69,8 70,0 5' >CH-OH 3,22 (1H, m) 76,9 76,8 6' -CH2-OH 3,68 (1H,ddd, 2; 5;10) 3,22 (1H, m) 60,8 61,0 C4-OH 8,98 (1 , s) C3, C4 3.1.3.11. Keát luaän Töø cao etanol cuûa loaøi H. nigricans phaân chia thaønh caùc loaïi cao khaùc nhau. Caùc loaïi cao naày ñöôïc saéc kyù coät vaø saéc kyù ñieàu cheá nhieàu laàn, thu ñöôïc 10 hôïp chaát. Söû duïng caùc phöông phaùp hoùa lyù hieän ñaïi nhö IR, EI-MS, LC-MS, 1H-, 13C- keát hôïp 2D-NMR ñaõ xaùc ñònh ñöôïc caáu truùc cuûa 10 hôïp chaát naày laø: stigmasterol, acid ursolic, acid oleanolic, α-amyrin, b-amyrin, primuletin, chrysin, luteolin, biochanin A vaø arbutin. 3.1.4. Keát luaän chung Vieäc khaûo saùt thaønh phaàn hoùa hoïc cuûa 3 loaøi thuoäc chi Hedyotis moïc ôû Vieät Nam (H. auricularia, H. biflora vaø H. nigricans) ñaõ coâ laäp ñöôïc 27 hôïp chaát. Söû duïng caùc phöông phaùp hoùa lyù hieän ñaïi nhö IR, EI-MS, LC-MS, phoå 1D vaø 2D-NMR ñaõ xaùc ñònh ñöôïc caáu truùc hoùa hoïc cuûa 27 hôïp chaát naày. Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 107 * Töø loaøi H. auriculari: 10 hôïp chaát ñaõ ñöôïc coâ laäp vaø xaùc ñònh caáu truùc laø quinizanin, b-sitosterol, 2-formyl-5-hydroxymetylfuran, acid ursolic, acid oleanolic, 1'-O-etyl-b-D-galactopyranosid, 6’-O-(1-hydroxymetyl-2-hydroxy-1- metoxy)etyl-1'-desoxyglucopyranosid, 3,7,2',4-tetrametoxy-5-hydroxyflavon, naringenin vaø stigmasterol 3-O-b-D-glucopyranosid. Trong möôøi hôïp chaát neâu treân, hôïp chaát 6’-O-(1-hydroxymetyl-2-hydroxy- 1-metoxy)etyl-1'-desoxyglucopyranosid laø moät hôïp chaát môùi. Caùc hôïp chaát quinizanin, 1'-O-etyl-b-D-galactopyranosid, 2-formyl-5-hydroxymetylfuran, naringenin vaø 3,7,2',4-tetrametoxy-5-hydroxyflavon laàn ñaàu tieân ñöôïc bieát ñeán coù hieän dieän trong chi Hedyotis. Caùc hôïp chaát coøn laïi, tuy ñaõ ñöôïc coâ laäp töø nhöõng loaøi cuøng chi khaùc, nhöng ñaây laø laàn ñaàu tieân ñöôïc bieát ñeán coù hieän dieän trong loaøi H. auricularia moïc ôû Vieät Nam. * Töø loaøi H. biflora: baûy hôïp chaát ñaõ ñöôïc coâ laäp vaø xaùc ñònh caáu truùc laø acid ursolic, acid oleanolic, rutin, quercetin, philonotisflavon 7-O-[4''''-O-b-D- galactopyranosyl]-b-D-glucopyranosid, spergulacin vaø b-sitosterol 3-O-b-D- glucopyranosid. Caùc hôïp chaát rutin, quercetin, philonotisflavon 7-O-[4''''-O-b-D- galactopyranosyl]-b-D-glucopyranosid vaø spergulacin laàn ñaàu tieân ñöôïc bieát ñeán coù hieän dieän trong chi Hedyotis. Caùc hôïp chaát coøn laïi, tuy ñaõ ñöôïc coâ laäp töø nhöõng loaøi cuøng chi khaùc, nhöng ñaây laø laàn ñaàu tieân ñöôïc bieát ñeán coù hieän dieän trong loaøi H. biflora moïc ôû Vieät Nam. * Töø loaøi H. nigricans: möôøi hôïp chaát ñaõ ñöôïc coâ laäp vaø xaùc ñònh caáu truùc laø stigmasterol, α-amyrin, b-amyrin, acid ursolic, acid oleanolic, primuletin, chrysin, luteolin, biochanin A vaø arbutin. Caùc hôïp chaát α-amyrin, b-amyrin, primuletin, chrysin, luteolin, biochanin A vaø arbutin laàn ñaàu tieân ñöôïc bieát ñeán coù hieän dieän trong chi Hedyotis. Caùc hôïp chaát coøn laïi, tuy ñaõ ñöôïc coâ laäp töø nhöõng loaøi cuøng chi khaùc, nhöng ñaây laø laàn ñaàu tieân ñöôïc bieát ñeán coù hieän dieän trong loaøi H. nigricans moïc ôû Vieät Nam. Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 108 & Caáu truùc hoùa hoïc caùc hôïp chaát coâ laäp ñöôïc töø ba loaøi Hedyotis khaûo saùt Stigmasterol 3-O- b -D-glucopyranosid O 3 18 2021 19 22 24 28 29 26 27 2523 5 6 11 15 Glc (H. biflora) HO 3 9 12 13 18 19 20 23 24 25 29 30 26 a -Amyrin (H. nigricans) b - Sitosterol (H. auricularia) HO 3 18 2021 19 22 24 28 29 26 27 2523 5 6 11 15 Stigmasterol (H. nigricans) HO 3 18 2021 19 22 24 28 29 26 27 2523 5 6 11 15 b - Sitosterol 3-O- b -D-glucopyranosid O 3 18 2021 19 22 24 28 29 26 27 2523 5 6 11 15 Glc (H. biflora) COOH HO 3 9 12 13 18 19 20 23 24 25 29 30 26 COOH HO 3 9 12 13 18 19 20 23 24 25 29 30 26 (H. auricularia, H. biflora, H. nigricans) Acid ursolic Acid oleanolic O O OH OH 1 2 341011 12 9 13 14 5 6 7 8 Quinizanin (H. auricularia) Quercetin OOH HO O 4' 3'2' 1' 5'6' 3 2 4 10 56 7 8 9 OH OH (H. biflora) OH HO 3 9 12 13 18 19 20 23 24 25 29 30 26 b -Amyrin (H. nigricans) OOH MeO O OMe 4' 3'2' 1' 5'6' 3 2 4 10 56 7 8 9 MeO OMe 3,7,2',4'-Tetrametoxy- 5-hydroxyflavon Naringenin OOH HO O OH 4' 3'2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 56 7 8 9 (H. auricularia)(H. auricularia) OOH O 4' 3' 2' 1' 5'6' 3 2 4 10 56 7 8 9 OOH HO O 4' 3'2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 56 7 8 9 Luteolin OOH HO O 4' 3'2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 56 7 8 9 OH OH ChrysinPrimuletin (H. nigricans) (H. nigricans) (H. nigricans) OOH O 4' 3'2'1' 5' 6' 3 2 4 10 5 6 7 8 9 1 HO OMeBiochanin A (H. nigricans) OH O HO HO OH OH 1' 2' 3' 4' 5' 6' O H 1 2 3 4 56 Arbutin (H. nigricans) O OH HO OH O OH 1 1' 2' 3' 4' 5' 6' CH3 2 1'-O- Etyl-b-D- galactopyranosid O CHOHOH2C 2 4 5 1 3 2-Formyl-5-hydroxy metylfuran (H. auricularia)(H. auricularia) IA 6' O OH OH HO O O HOHO H OH O H H OH O OH HO HO H3C O 2 34105 6 7 8 9 2' 3'4' 5'6'1' 1" 1"' (H. biflora)Rutin O OH OH O OO HO HO HO OH HHO H HO O OH OH HO O H OH OH IB IIA IIBO 1"" 1""' Philonotisflavon 7- O-[4""-O-b - D- galactopyranosyl] -b -D- glucopyranosid (H. biflora) OH OH H 8" O HO HO OH 1' 2' H H O C H2C O 3' 4' 5' 6' 1" 6'-O-(1-Hydroxymetyl-2-hydroxy-1-metoxy)etyl -1'-desoxyglucopyranosid O H3C H CH2 O H 2 (H. auricularia) O O HHO 24 HO H H OHO 23 25 26 27 28 29 30 2221 19 20 O Spergulacin 1' 2' 3' 4' 5' O OH HO HO 1" H HO 2"3" 5"6" 3 12 16 (H. biflora) H3C Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 109 * Haøm löôïng caùc chaát coâ laäp ñöôïc: caû ba loaøi caây Hedyotis khaûo saùt ñeàu chöùa acid ursolic vaø acid oleanolic vôùi haøm löôïng khaù cao (0,07 – 0,14 % so vôùi boät caây khoâ), ña soá caùc hôïp chaát coøn laïi ñöôïc coâ laäp vôùi haøm löôïng raát thaáp (0,0014 – 0,0021 % so vôùi boät caây khoâ). Arbutin, moät hôïp chaát thöôøng ñöôïc söû duïng ñeå baøo cheá caùc loaïi myõ phaãm döôõng traéng da, deã daøng ñöôïc coâ laäp vôùi haøm löôïng cao (1,24 % so vôùi boät caây khoâ) töø phaân ñoaïn 2 cuûa cao etyl acetat cuûa caây H. nigricans baèng caùch röûa vôùi cloroform laïnh vaø keát tinh laïi trong etyl acetat. Töø caùc hôïp chaát coâ laäp trong ba loaøi Hedyotis khaûo saùt cuõng nhö trong phaàn toång quan ôû trong caùc caây Hedyotis khaùc, chuùng toâi nhaän thaáy caùc caây thuoäc chi Hedyotis coù chöùa caùc loaïi hôïp chaát nhö sau: * Caùc hôïp chaát triterpenoid: Caùc triterpen thöôøng coù khung söôøn oleanan vaø ursan nhö α-amyrin, b-amyrin, acid ursolic vaø acid oleanolic. Ngoaøi ra coøn phaùt hieän theâm chi naày coù chöùa moät triterpen khung hopan thí duï nhö spergulacin trong caây H. biflora. * Caùc hôïp chaát quinonoid: caùc loaøi caây Hedyotis thöôøng coù chöùa benzoquinon vaø antraquinon. Benzoquinon nhö hôïp chaát 2,5-dimetoxy-1,4-benzoquinon trong H. dichotoma[8]. Antraquinon thöôøng laø loaïi 9,10-antraquinon nhö 1,4-dihydroxy- 9,10-antraquinon (H. auricularia); 2,3-dimetoxy-7-metyl-9,10-antraquinon vaø 3- hydroxy-2-metyl-1-metoxy-9,10-antraquinon (H. diffusa)[7,34]; 3-hydroxy-2- formyl-1-metoxy-9,10-antraquinon (H. corymbosa)[7]; capitellataquinon A, B, C vaø D (H. capitellata) [18]. Tuy nhieân cuõng coù gaëp loaïi 1,4-antraquinon nhö 2,3- dimetoxy-9-hydroxy-1,4-antraquinon trong H. dichotoma[19]. * Caùc hôïp chaát flavonoid: caùc loaøi caây Hedyotis thöôøng coù chöùa flavon vaø flavonol. Caùc hôïp chaát flavon nhö 3¢,4¢,5,6,7-pentametoxyflavon, 3¢,4¢,5¢,5,6,7- hexametoxyflavon, 3¢,4¢,5,6,7,8-hexametoxyflavon coù trong caây H. lindleyana[61]; chrysin, luteolin, primuletin trong H. nigricans. Caùc flavonol nhö quercetin, rutin, Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 110 philonotisflavon 7-O-[4''''-O-b-D-galactopyranosyl]-b-D-glucopyranosid trong loaøi H. biflora; 3,7,2',4'-tetrametoxy-5-hydroxyflavon trong loaøi H. auricularia; kaempferol 3-O-rutinosid trong H. lindleyana[103]; quercetin, quercetin 3-O-[2-O- (6-O-E-feruloyl)-β-D-glucopyranosyl]-β-D-glucopyranosid, quercetin 3-O-(2-O- β-D-glucopyranosyl)-β-D-galactopyranosid trong loaøi H. diffusa[96]. Flavanon nhö naringenin trong H. auricularia. Isoflavon nhö biochanin A trong H. nigricans. * Caùc hôïp chaát glycosid: caùc loaøi caây Hedyotis thöôøng coù chöùa caùc glycosid vôùi phaàn aglycon laø caùc maïch carbon ngaén, ñôn giaûn nhö 1'-O-etyl-b-D- galactopyranosid vaø 6’-O-(1-hydroxymetyl-2-hydroxy-1-metoxy)etyl-1'- desoxyglucopyranosid trong loaøi H. auricularia vaø 1'-O-(p-hydroxyphenyl)-b-D- glucopyranose (arbutin) trong loaøi H. nigricans. * Caùc hôïp chaát steroid: caùc loaøi caây Hedyotis thöôøng coù chöùa caùc steroid khung stigmastan nhö stigmasterol, b-sitosterol, g-sitosterol, b-sitosterol 3-O-b-D- glucopyranosid, stigmasterol 3-O-b-D-glucopyranosid (H. auricularia[21], H. biflora[22], H. nigricans[15], H. diffusa[50,89] vaø H. corymbosa[10,50]); (22E)-5a- stigmasta-7,22-dien-3-O-b-D-glucopyranosid vaø (22E)-5a-poriferasta-7,22-dien- 3-O-b-D-glucopyranosid trong H. dichotoma[8]. * Caùc hôïp chaát alcaloid: caùc loaøi caây Hedyotis thöôøng coù chöùa caùc alcaloid khung b-carbolin nhö hedyocapitellin, hedyocapitin, (-)-isocyclocapitellin, (+)- cyclocapitellin vaø isochrysotricin...trong caây H. capitellata[77-79]. Moät hôïp chaát alcaloid ñöôïc coâ laäp töø caây H. biflora[80] moïc ôû AÁn Ñoä laø auricularin. Tuy nhieân, trong ba caây Hedyotis khaûo saùt, chöa tìm thaáy coù alcaloid. * Caùc hôïp chaát iridoid: caùc loaøi caây Hedyotis thöôøng coù chöùa caùc iridoid glucosid nhö acid desacetylasperulosidic, acid asperulosidic, asperulosid, scandosid metyl ester... trong H. corymbosa[75]; 6-O-p-coumaroyl scandosid metyl ester, 6-O-p-metoxycinnamoyl scandosid metyl ester trong H. corymbosa[67]. Tuy nhieân, trong ba caây Hedyotis khaûo saùt, chöa tìm thaáy coù iridoid. Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 111 3.2. NHAÄN DANH CAÙC SAÛN PHAÅM THIOFLAVON ÑIEÀU CHEÁ ÑÖÔÏC 3.2.1. Nhaän danh caùc saûn phaåm töø söï alkyl hoùa caùc flavonoid Nhìn chung, phoå 1H- vaø 13C-NMR cuûa caùc hôïp chaát alkylflavon hay metylflavon cho caùc muõi coäng höôûng töông töï nhö cuûa caùc hôïp chaát meï flavon töông öùng. Ñieåm khaùc bieät laø söï xuaát hieän theâm caùc muõi coäng höôûng cuûa proton vaø carbon cuûa caùc nhoùm theá alkyl. Y 7-Dodecyloxy-5-hydroxyflavon OOH O O 4' 3'2' 1' 5'6' 3 2 4 10 56 7 8 9H2CH2C(H2C)9H3C 1"2"12" - Ñieåm noùng chaûy: 86 -870C. - Phoå APCI-MS (m/z): 421 [M-H]-. C27H34O4 (M=422) - Phoå IR (KBr, γ, cm-1): 3400, 2917, 1667, 1623, 1103, 822, 674. - Phoå UV (CH2Cl2, λ, nm; ε, L.mol-1.cm-1): 269 (7763), 312 (2843). - Phoå 1H- vaø 13C-NMR, CDCl3, (phuï luïc 87), dppm: baûng 3.26. Y 4’-Butyloxy-5,7-dihydroxyflavanon OOH O 4'3'2' 1' 5'6' 3 2 4 10 5 6 7 8 9 CH2 O CH2 CH2 CH3 1" 2" 3" 4" HO - Ñieåm noùng chaûy: 145 -1460C. - Phoå APCI-MS (m/z): 327 [M-H]-. C19H20O5 (M=328) - Phoå IR (KBr, γ, cm-1): 3313, 2958, 1634, 1612, 1096, 829, 670. - Phoå UV (CH2Cl2, λ, nm; ε, L.mol-1.cm-1): 276 (3432), 356 (4524). - Phoå 1H- vaø 13C-NMR, CDCl3, (phuï luïc 88), dppm: baûng 3.27. Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 112 Y 4'-Metoxy-5,7-dihydroxyisoflavon OOH HO O OCH3 2 3 4 10 5 6 7 8 9 1' 2' 3' 4'6'5' - Ñieåm noùng chaûy: 211 -2120C. - Phoå APCI-MS (m/z): 283 [M-H]-. C16H12O5 (M=284) - Phoå IR (KBr, γ, cm-1): 3312, 2958, 1638, 1596, 1096, 829, 670. - Phoå UV (CH2Cl2, λ, nm; ε, L.mol-1.cm-1): 276 (3432), 356 (4524). - Phoå 1H- vaø 13C-NMR, CDCl3, (phuï luïc 89), dppm: baûng 3.28. Y 3,7,2',4'-Tetrametoxy-5-hydroxyflavon OOH MeO O 4' 3'2' 1' 5'6' 3 2 4 10 56 7 8 9 OMe OMeMeO - Ñieåm noùng chaûy: 130 -1310C. - Phoå APCI-MS (m/z): 357 [M-H]-. C19H18O7 (M=358) - Phoå IR (KBr, γ, cm-1): 2980, 1655, 1621, 1088, 822, 675. - Phoå UV (CH2Cl2, λ, nm; ε, L.mol-1.cm-1): 265 (6114), 359 (5849). - Phoå 1H- vaø 13C-NMR, CDCl3, (phuï luïc 90), dppm: baûng 3.29. Y 3,7,3',4'-Tetrametoxy-5-hydroxyflavon OOH MeO O 4' 3'2' 1' 5'6' 3 2 4 10 56 7 8 9 OMe OMe OMe - Ñieåm noùng chaûy: 157 -1580C. - Phoå APCI-MS (m/z): 357 [M-H]-. C19H18O7 (M=358) Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 113 - Phoå IR (KBr, γ, cm-1): 2946, 1655, 1589, 1094, 822, 667. - Phoå UV (CH2Cl2, λ, nm; ε, L.mol-1.cm-1): 254 (5658), 351 (5595). - Phoå 1H- vaø 13C-NMR, CDCl3, (phuï luïc 91), dppm: baûng 3.30. 3.2.2. Nhaän danh caùc saûn phaåm töø söï thio hoùa caùc flavonoid Phoå proton NMR cuûa caùc hôïp chaát thioflavonoid toång hôïp ñöôïc töông töï nhö phoå proton NMR cuûa caùc hôïp chaát flavonoid töông öùng ban ñaàu (hay coøn goïi laø hôïp chaát meï). Ñieåm khaùc bieät laø proton gaén treân carbon lieân hôïp vôùi thiocarbonyl (H-3) coù ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc dòch chuyeån moät khoaûng 0,7-1,0 ppm veà vuøng töø tröôøng thaáp hôn. Ñieåm ghi nhaän naøy phuø hôïp vôùi nhaän xeùt cuûa caùc taùc giaû E. U. MUGHAL[32], A. LEVAI[16] vaø R. S. BECKER[34]. Ngoaøi ra, khi ñoái chieáu phoå proton NMR cuûa caùc thioflavonoid coù mang nhoùm theá –OH taïi C-5 taïo lieân keát caàu hydro vôùi carbon carbonyl taïi C-4 vôùi hôïp chaát flavon ban ñaàu, chuùng toâi phaùt hieän thaáy ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc cuûa nhoùm –OH taïo lieân keát caàu hydro trong hôïp chaát thioflavon dòch chuyeån moät khoaûng 1,0-1,5 ppm veà vuøng töø tröôøng thaáp hôn. Phoå 13C-NMR cuûa caùc hôïp chaát thioflavon toång hôïp ñöôïc gioáng nhö phoå 13C-NMR cuûa caùc hôïp chaát flavon töông öùng ban ñaàu. Tuy nhieân, ngoaøi ñieåm khaùc bieät treân ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc cuûa ba carbon C-2, C-3 vaø C-4 ñaõ ñöôïc caùc taùc giaû ghi nhaän[16,26], chuùng toâi nhaän thaáy raèng ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc cuûa hai carbon coøn laïi treân voøng C cuûa khung flavon laø C-9 vaø C-10 cuõng coù söï khaùc bieät so vôùi caùc carbon töông öùng cuûa hôïp chaát flavon ban ñaàu. Söï khaùc bieät veà ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc naày ñöôïc trình baøy trong baûng 3.22. Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 114 Baûng 3.22: So saùnh söï khaùc bieät veà ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc cuûa moät vaøi carbon trong hôïp chaát flavon vaø thioflavon töông öùng. OMe OO MeO O OMe OMe 3,7,3',4'-Tetrametoxy -5-hydroxyflavon H OMe SO MeO O OMe OMe 3,7,3',4'-Tetrametoxy -5-hydroxythioflavon H 155.2 138.7 178.5 105.8 156.5 192.5 147.1 151.8149.8 114.4O O Flavon 178.5 107.7 163.51 2 34 156.3 124.1 9 10 O S 4-Thioflavon 202.5 120.2 151.51 2 34 154.2 131.1 9 10 Carbon Flavon (dC) Thioflavon (dC) Nhaän xeùt veà ñoä dòch chuyeån hoùa hoïc C-2 154-164 145-154 Leäch veà vuøng tröôøng cao hôn moät khoaûng 4 -15 ppm C-3 105-140 127-149 Leäch veà vuøng tröôøng thaáp hôn moät khoaûng 10-25 ppm C-4 170-185 195-210 Leäch veà vuøng tröôøng thaáp hôn moät khoaûng 15-25 ppm C-9 156-163 150-155 Leäch veà vuøng tröôøng cao hôn moät khoaûng 3 -8 ppm C-10 103-124 113-131 Leäch veà vuøng tröôøng thaáp hôn moät khoaûng 10-25 ppm Y 4-Thioflavon S O 4'3'2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 56 7 8 9 - Ñieåm noùng chaûy: 84-850C. - Phoå APCI-MS (m/z): 237 [M-H]-. C15H10SO (M=238) - Phoå IR (KBr, γ, cm-1): 2980, 1638, 1550, 1459, 1172 (C=S), 1059, 873, 685. - Phoå UV (CH2Cl2, λ, nm; ε, L.mol-1.cm-1): 314 (3006), 395 (2456). - Phoå 1H- vaø 13C-NMR, CDCl3, (phuï luïc 92, 93), dppm: baûng 3.23. Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 115 Baûng 3.23: Soá lieäu phoå NMR cuûa 4-thioflavon coù so saùnh vôùi flavon[95] Flavon (DMSO) 4-Thioflavon (CDCl3) N0 dC dH (J tính baèng Hz) dC dH (J tính baèng Hz) 2 163,5 - 151,5 - 3 107,7 6,84 (s) 120,2 7,78 (s) 4 178,5 - 202,3 - 5 125,3 8,26 (dd, 1,5; 7,6) 126,0 8,59 (dd, 1,5; 8,1) 6 129,3 7,43 (m) 131,9 7,41 (ddd, 0,9; 8,1) 7 133,8 7,71 (dd, 1,8; 7,2) 134,2 7,71 (ddd, 1,5, 6,9; 7,2) 8 118,1 7,60 (m) 118,4 7,60 (dd, 0,9; 7,2) 9 156,3 - 154,2 - 10 124,0 - 131,1 - 1' 131,9 - 129,9 - 2', 6' 125,8 7,94 (m) 126,6 7,98 (dd, 1,5; 7,5) 3', 5' 126,3 7,54 (m) 128,7 7,51 (m) 4' 131,6 7,57 (m) 129,2 7,56 (m) Y 5-Hydroxythioflavon (Thioprimuletin) S O 4'3'2' 1' 5' 6' 3 2 4 10 56 7 8 9 OH - Ñieåm noùng chaûy: 132-1330C. - Phoå APCI-MS (m/z): 253 [M-H]-. C15H10SO2 (M=254) - Phoå IR (KBr, γ, cm-1): 3401, 3057, 1630, 1575, 1497, 1166 (C=S), 1028, 874, 683. - Phoå UV (CH2Cl2, λ, nm; ε, L.mol-1.cm-1): 325 (5956), 359 (4554). - Phoå 1H- vaø 13C-NMR, CDCl3, (phuï luïc 94, 95), dppm: baûng 3.24. Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 116 Baûng 3.24: Soá lieäu phoå NMR cuûa hôïp chaát 5-hydroxythioflavon so saùnh vôùi 5-hydroxyflavon [95] 5-Hydroxyflavon (DMSO) 5-Hydroxythioflavon (CDCl3) N0 dC dH (J baèng Hz) dC dH (J baèng Hz) 2 164,1 - 152,5 - 3 105,7 7,12 (s) 119,6 7,49 (s) 4 183,2 - 200,7 - 5 159,8 - 161,1 - 6 111,0 6,82 (d, 8,4) 113,5 6,88 (d, 8,4) 7 135,9 7,73 (dd, 8,4; 8,4) 135,2 7,69 (dd, 8,4; 8,4) 8 107,5 7,19 (d, 8,4) 107,4 7,12 (d, 8,4) 9 155,9 - 154,7 - 10 110,1 - 118,1 - 1' 130,5 - 130,2 - 2', 6' 126,6 8,17 (dd, 1,8; 7,8) 126,7 8,12 (dd, 1,2;7,8) 3', 5' 129,2 7,59 (m) 129,2 7,52 (m) 4' 132,3 7,62 (m) 132,2 7,61 (m) C5-OH 12,65 (s) 13,49 (s) Y 5,7-Dihydroxythioflavon (Thiochrysin) S O 4'3'2' 1' 5'6' 3 2 4 10 56 7 8 9 OH HO - Ñieåm noùng chaûy: 216-2170C. - Phoå APCI-MS (m/z): 269 [M-H]-. C15H10SO3 (M=270) - Phoå IR (KBr, γ, cm-1): 3400, 3057, 1598, 1460, 1167 (C=S), 1028, 876, 685. - Phoå UV (CH2Cl2, λ, nm; ε, L.mol-1.cm-1): 325 (5956), 344 (1778). - Phoå 1H- vaø 13C-NMR, CDCl3, (phuï luïc 96, 97), dppm: baûng 3.25. Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 117 Baûng 3.25: Soá lieäu phoå NMR cuûa hôïp chaát 5,7-dihydroxythioflavon so saùnh vôùi 5,7- dihydroxyflavon [95] 5,7-Dihydroxyflavon (DMSO) 5,7-Dihydroxythioflavon (CDCl3) N0 dC dH (J tính baèng Hz) dC dH (J tính baèng Hz) 2 163,2 - 161,1 - 3 105,2 7,12 (s) 117,3 7,49 (s) 4 181,9 - 195,9 - 5 161,5 - 161,7 - 6 99,0 6,82 (d, 8,4) 100,8 6,88 (d, 8,4) 7 164,4 7,73 (dd, 8,4; 8,4) 163,1 7,69 (dd, 8,4; 8,4) 8 94,1 7,19 (d, 8,4) 94,7 7,12 (d, 8,4) 9 157,5 - 154,1 - 10 103,9 - 112,5 - 1' 130,7 - 130,7 - 2', 6' 126,4 8,17 (dd, 1,8; 7,8) 126,6 8,12 (dd, 1,2;7,8) 3', 5' 129,1 7,59 (m) 129,2 7,52 (m) 4' 132,0 7,62 (m) 132,0 7,61 (m) C5-OH - 12,65 (s) - 13,49 (s) C7-OH - 10,92 (s) - - Y 7-Dodecyloxy-5-hydroxythioflavon SOH O O 4'3'2' 1' 5'6' 3 2 4 10 56 7 8 9H2CH2C(H2C)9H3C 1"2"12" - Ñieåm noùng chaûy: 104 -1050C. - Phoå APCI-MS (m/z): 437 [M-H]-. C27H34SO3 (M=438) - Phoå IR (KBr, γ, cm-1): 3400, 2922, 1645, 1598, 1178, 874, 769. - Phoå UV (CH2Cl2, λ, nm; ε, L.mol-1.cm-1): 274 (6035), 344 (3617) - Phoå 1H- vaø 13C-NMR, CDCl3, (phuï luïc 98, 99), dppm: baûng 3.26. - Phoå TOCSY, HSQC vaø HMBC (phuï luïc 100, 101, 102), dppm: baûng 3.26. Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 118 Baûng 3.26: Soá lieäu phoå NMR cuûa hôïp chaát 7-dodecyloxy-5-hydroxyflavon vaø 7-dodecyloxy-5-hydroxythioflavon coù so saùnh vôùi chrysin[95] 7-Dodecyloxy- 5-hydroxyflavon (CDCl3) 7-Dodecyloxy-5-hydroxy thioflavon (CDCl3) N0 dC dC dH (J baèng Hz) HMBC (H " C) 2 163,9 154,2 - - 3 105,9 118,4 7,34 (s) C2, C10, C1' 4 183,5 197,8 - - 5 162,2 162,6 - - 6 98,6 99,5 6,48 (d, 2,4) C5, C7, C8 7 165,3 164,8 - - 8 93,1 93,8 6,42 (d, 2,4) C6, C7, C9, C10 9 157,8 154,1 - - 10 105,6 114,0 - - 1' 131,4 131,9 - - 2', 6' 126,3 126,5 7,88 (dd, 1,5; 7,8) C2, C2', C3', C6' 3', 5' 129,1 129,2 7,50 (m) C1', C2', C4' 4' 131,8 131,9 7,53 (m) C2', C3' C5-OH - - 13,60 (s) C5, C6, C10 1'' 68,7 68,9 4,02 (2H, t) 2'' 34,1 34,1 3,39 (2H, t) 3'' 31,9 31,9 1,83-1,20 (2H, m) 4'' 32,8 32,8 1,83-1,20 (2H, m) 5'' 29,6 29,6 1,83-1,20 (2H, m) 6'' 29,5 29,5 1,83-1,20 (2H, m) 7'' 28,9 28,9 1,83-1,20 (2H, m) 8'' 28,8 28,8 1,83-1,20 (2H, m) 9'' 28,2 28,2 1,83-1,20 (2H, m) 10'' 25,9 25,9 1,83-1,20 (2H, m) 11'' 22,7 22,7 1,83-1,20 (2H, m) 12'' 14,1 14,1 0,88 (3H, t) Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 119 Y 4'-Butyloxy-5,7-dihydroxythioflavon SOH O 4'3'2' 1' 5'6' 3 2 4 1056 7 8 9 CH2 O CH2 CH2 CH3 1" 2" 3" 4" HO - Ñieåm noùng chaûy: 175 -1760C. - Phoå APCI-MS (m/z): 341 [M-H]-. C19H18SO4 (M=342) - Phoå IR (KBr, γ, cm-1): 3313, 2954, 1648, 1599, 1177, 873, 681. - Phoå UV (CH2Cl2, λ, nm; ε, L.mol-1.cm-1): 275 (3186), 356 (4201). - Phoå 1H- vaø 13C-NMR, CDCl3, (phuï luïc 103, 104), dppm: baûng 3.27. Baûng 3.27: Soá lieäu phoå NMR cuûa 4’-butyloxy-5,7-dihydroxyflavanon vaø 4’-butyloxy-5,7-dihydroxythioflavon coù so saùnh vôùi 5,7,4’-trihydroxyflavanon [51] 4’-Butyloxy-5,7-dihydroxy flavanon (CDCl3) 4’-Butyloxy-5,7-dihydroxy thioflavon (CDCl3) N0 dC dH (J tính baèng Hz) dC dH (J tính baèng Hz) 2 78,9 5,36 (dd, 3,0; 9,9) 154,1 - 3 43,2 3,08, 2,78 (dd, 3,0; 9,9) 117,9 7,30 (s) 4 196,0 - 197,6 - 5 164,1 - 162,7 - 6 95,6 6,06 (d, 2,1) 100,1 6,50 (d, 2,1) 7 167,7 - 164,8 - 8 94,6 6,03 (d, 2,1) 93,6 6,45 (d, 2,1) 9 162,9 - 153,7 - 10 103,0 - 113,9 - 1' 130,6 - 129,0 - 2', 6' 127,9 7,33 (dd, 2,1; 6,6) 127,0 7,78 (dd, 2,1; 6,9) 3', 5' 115,6 6,89 (dd, 2,1; 6,6) 117,9 7,37 (dd, 2,1; 6,9) 4' 156,2 - 153,7 - 1'' 68,3 3,97 (2H, t) 68,5 4,06 (2H, t) 2'' 30,9 1,75 (2H, t) 31,9 1,81 (2H, t) 3'' 19,1 1,44 (2H, m) 19,1 1,47 (2H, m) 4'' 13,7 0,95 (3H, t) 13,8 0,99 (3H, t) C5-OH - 12,05 (s) - 13,61 (s) Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 120 Y 4'-Metoxy-5,7-dihydroxythioisoflavon SOH HO O OMe 2 3 4 1056 7 8 9 1' 2' 3' 4'6' 5' - Ñieåm noùng chaûy: 162 -1640C. - Phoå APCI-MS (m/z): 299 [M-H]-. C16H12SO4 (M=300) - Phoå UV (CH2Cl2, λ, nm; ε, L.mol-1.cm-1): 269 (5446), 359 (4663). - Phoå 1H- vaø 13C-NMR, CDCl3, (phuï luïc 105, 106), dppm: baûng 3.28. Baûng 3.28: Soá lieäu NMR cuûa 4'-metoxy-5,7-dihydroxyisoflavon vaø 4'-metoxy- 5,7-dihydroxythioisoflavon coù so saùnh vôùi 5,7,4'-trihydroxyisoflavon[58] 4'-Metoxy-5,7-dihydroxy isoflavon (CDCl3) 4'-Metoxy-5,7-dihydroxy thioisoflavon (CDCl3) N0 dC dH (J tính baèng Hz) dC dH (J tính baèng Hz) 2 154,3 8,38 (s) 145,1 7,52 (s) 3 122,5 - 133,1 - 4 180,4 - 198,4 - 5 161,7 - 162,6 - 6 97,9 6,62 (d, 2,4) 101,2 6,34 (d, 2,4) 7 165,2 - 163,3 - 8 92,3 6,39 (d, 2,4) 94,3 6,30 (d, 2,4) 9 157,5 - 153,8 - 10 105,4 - 114,1 - 1' 121,0 - 125,9 - 2', 6' 130,1 7,40 (d, 8,7) 131,4 7,28 (d, 8,7) 3', 5' 115,1 6,84 (d, 8,7) 115,3 6,95 (d, 8,7) 4' 157,5 - 159,8 - -OCH3 55,6 3,72 (3H, s) 55,3 3,81 (3H, s) C5-OH - 12,95 (s) - 14,09 (s) C7-OH - 9,61 (s) - - Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 121 Y 3,7,2',4'-Tetrametoxy-5-hydroxythioflavon SOH MeO O 4' 3' 2' 1' 5' 6' 3 2 4 1056 7 8 9 OMe OMeMeO - Ñieåm noùng chaûy: 157 -1580C. - Phoå APCI-MS (m/z): 373 [M-H]-. C19H18SO6 (M=374). - Phoå IR (KBr, γ, cm-1): 2925, 1646, 1584, 1162, 837, 6750. - Phoå UV (CH2Cl2, λ, nm; ε, L.mol-1.cm-1): 267 (3992), 359 (5085). - Phoå 1H- vaø 13C-NMR, CDCl3, (phuï luïc 107, 108), dppm: baûng 3.29. Y 3,7,3',4'-tetrametoxy-5-hydroxythioflavon SOH MeO O 4'3'2' 1' 5' 6' 3 2 4 1056 7 8 9 OMe OMe OMe - Ñieåm noùng chaûy: 168 -1690C. - Phoå APCI-MS (m/z): 373 [M-H]-. C19H18SO6 (M=374). - Phoå IR (KBr, γ, cm-1): 2934, 1646, 1584, 11159, 876, 667. - Phoå UV (CH2Cl2, λ, nm; ε, L.mol-1.cm-1): 268 (6204), 359 (6315). - Phoå 1H- vaø 13C-NMR, CDCl3, (phuï luïc 109, 110), dppm: baûng 3.30. Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 122 Baûng 3.29: Soá lieäu phoå NMR cuûa 3,7,2',4'-tetrametoxy-5-hydroxyflavon vaø 3,7,2',4'-tetrametoxy-5-hydroxythioflavon coù so saùnh vôùi morin[35] 3,7,2',4'-Tetrametoxy-5- hydroxyflavon (CDCl3) 3,7,2',4'-Tetrametoxy-5- hydroxythioflavon (CDCl3) N0 dC dH (J tính baèng Hz) dC dH (J tính baèng Hz) 2 156,4 - 151,2 - 3 139,9 - 148,5 7,37(s) 4 178,7 - 193,2 - 5 162,9 - 162,9 - 6 97,7 6,35 (1H, d, 2,4) 99,2 6,46 (1H, d, 2,4) 7 165,1 - 164,9 - 8 92,1 6,31 (1H, d, 2,4) 92,7 6,42 (1H, d, 2,4) 9 157,3 - 153,7 - 10 104,7 - 115,3 - 1' 112,3 - 112,1 - 2' 158,6 - 159,4 - 3' 104,5 6,59 (1H, d, 2,4) 105,1 6,58 (1H, d, 2,1) 4' 161,9 - 163,2 - 5' 106,4 6,56 (1H, dd, 2,1; 8,4) 105,1 6,58 (1H, dd, 2,1; 8,4) 6' 131,6 7,35 (1H, d, 8,4) 132,3 7,47 (1H, d, 8,4) C3-OCH3 60,4 3,86 (3H, s) 60,4 3,59 (3H, s) C7-OCH3 55,4 3,77 (3H, s) 55,4 3,84 (3H, s) C2'-OCH3 55,6 3,82 (3H, s) 55,6 3,89 (3H, s) C4'-OCH3 55,6 3,82 (3H, s) 55,6 3,87 (3H, s) C5-OH 12,68 (1H, s) 14,08 (1H, s) Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 123 Baûng 3.30: Soá lieäu phoå NMR cuûa 3,7,3',4'-tetrametoxy-5-hydroxyflavon vaø 3,7,3',4'-tetrametoxy-5-hydroxythioflavon coù so saùnh vôùi quercetin[66] 3,7,3',4'-Tetrametoxy-5- hydroxyflavon (CDCl3) 3,7,3',4'-Tetrametoxy-5- hydroxythioflavon (CDCl3) N0 dC dH (J tính baèng Hz) dC dH (J tính baèng Hz) 2 155,2 - 151,8 - 3 138,8 - 147,1 7,37(s) 4 178,5 - 192,5 - 5 161,8 - 162,7 - 6 97,7 6,37 (1H, d, 2,4) 99,4 6,49 (1H, d, 2,7) 7 165,3 - 164,8 - 8 92,0 6,27 (1H, d, 2,4) 92,5 6,46 (1H, d, 2,7) 9 156,5 - 149,8 - 10 105,8 - 114,4 - 1' 122,7 - 122,9 - 2' 110,7 7,69 (1H, d, 2,1) 111,6 7,81 (1H, d, 2,1) 3' 148,6 - 148,9 - 4' 151,2 - 152,9 - 5' 111,1 6,93 (1H, d, 8,4) 111,0 7,00 (1H, d, 9,3) 6' 122,0 7,65 (1H, dd, 2,1;,4) 122,3 7,79 (1H, dd, 2,4; 8,9) C3-OCH3 59,9 3,92 (3H, s) 59,2 3,89 (3H, s) C7-OCH3 55,6 3,92 (3H, s) 55,8 3,74 (3H, s) C3'-OCH3 55,9 3,82 (3H, s) 56,1 3,98 (3H, s) C4'-OCH3 55,8 3,82 (3H, s) 56,0 3,95 (3H, s) C5-OH - 12,62 (1H, s) - 14,07 (1H, s) Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 124 3.2.3. Keát luaän Trong soá taùm hôïp chaát thioflavon ñieàu cheá ñöôïc, ngoaïi tröø ba hôïp chaát ñaõ ñöôïc ñieàu cheá laø 4-thioflavon (ñöôïc ñieàu cheá vôùi cuøng phöông phaùp bôûi Varma[100]), 5-hydroxythioflavon, 5,7-dihydroxythioflavon (ñöôïc ñieàu cheá bôûi Elisei[34], nhöng ñaây laø laàn ñaàu tieân ñöôïc ñieàu cheá baèng phöông phaùp chieáu xaï vi soùng khoâng dung moâi), naêm hôïp chaát thioflavon coøn laïi laø: 7-dodecyloxy-5- hydroxythioflavon, 4'-butyloxy-5,7-dihydroxythioflavon, 4'-metoxy-5,7- dihydroxythioisoflavon, 3,7,2',4'-tetrametoxy-5-hydroxythioflavon vaø 3,7,3',4'- tetrametoxy-5-hydroxythioflavon ñeàu laø nhöõng hôïp chaát môùi, laàn ñaàu tieân ñöôïc ñieàu cheá vaø xaùc ñònh caáu truùc baèng nhöõng phöông phaùp hoùa lyù hieän ñaïi. O S 2 34 1056 7 8 9 1 2' 4' 5' 6' 1' 3' OH 5-Hydroxythioflavon 5,7-Dihydroxythioflavon O S 2 34 1056 7 8 9 1 2' 4' 5' 6' 1' 3' OH HOO S 2 34 1056 7 8 9 1 2' 4' 5' 6' 1' 3' 4-Thioflavon 7-Dodecyloxy-5-hydroxy thioflavon O S 2 34 1056 7 8 9 1 2' 4' 5' 6' 1' 3' OH C12H25O 4'-Butyloxy-5,7-dihydroxy thioflavon 4'-Metoxy-5,7-dihydroxy isothioflavon O S 2 34 1056 7 8 9 1 2' 4' 5' 6' 1' 3' OH HO OC4H9 O S 2 34 1056 7 8 9 1 OH HO OMe 1' 4' 3,7,2',4'-Tetrametoxy-5-hydroxy thioflavon 3,7,3',4'-Tetrametoxy-5-hydroxythioflavon O S 2 34 1056 7 8 9 1 2' 4' 5' 6' 1' 3' OH MeO OMe MeO OMe O S 2 34 1056 7 8 9 1 2' 4' 5' 6' 1' 3' OH MeO OMe OMe OMe Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 125 3.3. KEÁT QUAÛ THÖÛ NGHIEÄM HOAÏT TÍNH SINH HOÏC Moät soá cao chieát vaø hôïp chaát ñöôïc thöû nghieäm caùc hoaït tính sinh hoïc sau: Y Thöû nghieäm hoaït tính khaùng kyù sinh truøng soát reùt Plasmodium falciparum. Y Thöû nghieäm hoaït tính khaùng khuaån treân boán chuûng Escherichia coli (Gram aâm), Salmonela typhi (Gram aâm), Staphylococus (Gram döông) vaø Bacillus subtilis (Gram döông). Y Thöû nghieäm hoaït tính Brine shrimp vaø khaû naêng gaây ñoäc teá baøo treân doøng teá baøo ung thö vuù MCF-7. 3.3.1. Thöû tính khaùng kyù sinh truøng soát reùt Plasmodium falciparum. Maãu thöû laø cao etanol thoâ ban ñaàu cuûa 3 caây Hedyotis khaûo saùt. Keát quaû cho thaáy, ôû noàng ñoä 100 mg/ml, cao etanol thoâ cuûa H. auricularia vaø H. nigricans ñeàu khoâng coù hoaït tính khaùng kyù sinh truøng soát reùt Plasmodium falciparum. Chính vì theá, cao etanol thoâ coøn laïi cuûa H. biflora khoâng ñöôïc nhaän thöû tieáp. Nhaän xeùt: Caùc cao etanol thoâ ban ñaàu cuûa ba caây Hedyotis khaûo saùt ñeàu khoâng coù khaû naêng gieát cheát kyù sinh truøng soát reùt Plasmodium falciparum, ñieàu naày cuõng phuø hôïp vôùi vieäc chöa thaáy taøi lieäu naøo noùi ñeán hoaït tính khaùng soát reùt cuûa caùc caây thuoäc chi Hedyotis. 3.3.2. Thöû tính khaùng khuaån Maãu thöû laø cao etanol thoâ ban ñaàu cuûa ba caây Hedyotis khaûo saùt, thöû ôû noàng ñoä 100 mg/ml. Keát quaû ñöôïc tính baèng baùn kính voøng voâ khuaån (keå töø ñóa giaáy), tính baèng ñôn vò mm, trình baøy trong baûng 3.31. Nhaän xeùt: Caùc cao etanol thoâ cho thaáy coù hoaït tính khaùng khuaån vôùi caùc möùc ñoä maïnh, yeáu khaùc nhau. Y Cao etanol thoâ ban ñaàu cuûa H. auricularia coù hoaït tính toát vôùi caùc chuûng Staphylococus aureus vaø Escherichia coli. Y Cao etanol thoâ ban ñaàu cuûa H. nigricans coù hoaït tính toát vôùi caùc chuûng Bacillus subtilis, Escherichia coli vaø Salmonela typhi. Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 126 Baûng 3.31: Keát quaû thöû nghieäm hoaït tính khaùng khuaån cuûa cao alcol cuûa ba caây Hedyotis khaûo saùt (tính baèng baùn kính voøng voâ khuaån keå töø ñóa giaáy, mm). Cao alcol cuûa caây Staphylococus aureus Bacillus subtilis Escherichia coli Salmonela typhi H. auricularia 3 1 2 - H. biflora - - 1 1 H. nigricans - 3 2 3 Ghi chuù: (-): khoâng thaáy roõ tính khaùng khuaån 3.3.3. Thöû nghieäm ñoäc tính Brine shrimp vaø khaû naêng gaây ñoäc teá baøo treân doøng teá baøo ung thö vuù MCF-7 3.3.3.1. Thöû nghieäm ñoäc tính Brine shrimp Maãu thöû laø cao trích vaø moät soá hôïp chaát coâ laäp ñöôïc. Keát quaû ñöôïc tính baèng lieàu LC50 (mg/ml) laø noàng ñoä hoaït chaát (mg/ml) gaây cheát 50% soá aáu theå Artemia salina thöû nghieäm, trình baøy trong baûng 3.32. 3.3.3.2. Thöû khaû naêng gaây ñoäc teá baøo treân doøng teá baøo ung thö vuù MCF-7 Maãu thöû laø cao trích vaø moät soá hôïp chaát coâ laäp ñöôïc. Keát quaû ñöôïc tính baèng giaù trò I%, bieåu thò khaû naêng khaùng phaân baøo cuûa chaát thöû. Giaù trò I% caøng lôùn, chaát thöû coù hoaït tính caøng maïnh. Keát quaû ñöôïc trình baøy trong baûng 3.32. 3.3.3.3. Nhaän xeùt keát quaû thöû nghieäm Keát quaû thöû nghieäm ñoäc tính Brine shrimp vaø khaû naêng gaây ñoäc teá baøo treân doøng teá baøo ung thö vuù MCF-7 cho keát quaû khaù töông ñoàng, ngoaïi tröø hôïp chaát arbutin (LC50=20 mg/ml) vaø rutin (LC50=50 mg/ml) coù ñoäc tính Brine shrimp maïnh nhöng khoâng ñoäc ñoái vôùi doøng teá baøo ung thö vuù MCF-7 (I%= 1,33 ñoái vôùi arbutin vaø I%= 3,53 ñoái vôùi rutin). Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 127 Y Veà ñoäc tính Brine shrimp - Moät soá cao chieát cho ñoäc tính Brine shrimp maïnh nhö cao etanol thoâ ban ñaàu vaø cao cloroform cuûa H. auricularia; cao etanol thoâ ban ñaàu, cao cloroform, cao etyl acetat vaø nhaát laø cao metanol cuûa H. nigricans. - Moät soá hôïp chaát cho ñoäc tính Brine shrimp maïnh nhö 1,4-dihydroxy-9,10- antraquinon, rutin, 5-hydroxyflavon, 5-hydroxythioflavon, 5,7-dihydroxyflavon, 4'-butyloxy-5,7-dihydroxyflavanon, 5,7,4'-trihydroxyflavanon, arbutin, a-amyrin, 5,7,4'-trihydroxyisoflavon, acid oleanolic vaø nhaát laø acid ursolic. Y Veà khaû naêng gaây ñoäc teá baøo treân doøng teá baøo ung thö vuù MCF-7 - Moät soá cao chieát coù hoaït tính toát nhö cao etanol thoâ ban ñaàu, cao cloroform cuûa H. auricularia vaø nhaát laø cao metanol cuûa H. nigricans. - Trong soá caùc hôïp chaát thöû nghieäm, hai hôïp chaát 4'-butyloxy-5,7- dihydroxyflavanon (I%= 92,60) vaø nhaát laø a-amyrin (I%= 98,23) cho hoaït tính maïnh nhaát, hai hôïp chaát 5,7,4'-trihydroxyflavanon vaø 5,7,4'-trihydroxyisoflavon cho hoaït tính khaù treân doøng teá baøo ung thö vuù MCF-7. Y Veà so saùnh hoaït tính khaùng ung thö treân doøng teá baøo ung thö vuù MCF-7 cuûa moät soá hôïp chaát thioflavon vaø flavon töông öùng: trong soá caùc hôïp chaát thöû nghieäm, hai caëp hôïp chaát 5-hydroxythioflavon (I%= 21,83) vaø 5-hydroxyflavon (I%= 20,39); 3,7,2',4'-tetrametoxy-5-hydroxythioflavon (I%= 9,89) vaø 3,7,2',4'- tetrametoxy-5-hydroxyflavon (I%= 9,59) cho hoaït tính gaàn nhö töông töï nhau, trong khi ñoù 4'-butyloxy-5,7-dihydroxythioflavon (I%= 28,04) cho hoaït tính yeáu hôn nhieàu so vôùi 4'-butyloxy-5,7-dihydroxyflavanon (I%=92,60). Rieâng hôïp chaát 5,7,4'-trihydroxyflavanon (I%=71,92) sau khi ñöôïc alkyl hoùa thaønh 4’-butyloxy- 5,7-dihydroxyflavanon (I%= 92,60) cho hoaït tính maïnh hôn thaáy roõ. Luaän aùn Tieán só Hoùa hoïc Phaàn Keát quaû & Thaûo luaän 128 Baûng 3.32: Keát quaû thöû nghieäm ñoäc tính Brine shrimp vaø khaû naêng gaây ñoäc teá baøo treân doøng teá baøo ung thö vuù MCF-7. N0 Loaïi cao chieát hoaëc hôïp chaát tinh khieát Ñoäc tính Brine shrimp LC50 (mg/ml) Gaây ñoäc teá baøo ung thö vuù MCF-7 (I%) 1 Gossypol (Maãu chöùng döông) 10 97,10 2 Cao etanol thoâ ban ñaàu H. auricularia 100 40,86 3 Cao cloroform H. auricularia 100 47,97 4 Cao etanol thoâ ban ñaàu H. biflora 1000 - 4,78 5 Cao metanol H. biflora 500 9,63 6 Cao etanol thoâ ban ñaàu H. nigricans 100 24,27 7 Cao eter daàu hoûa H. nigricans 500 1,25 8 Cao cloroform H. nigricans 100 31,07 9 Cao etyl acetat H. nigricans 100 13,54 10 Cao metanol H. nigricans 10 65,13 11 Acid ursolic 0,1 64,59 12 Acid oleanolic 10 19,16 13 a-Amyrin 10 98,23 14 Arbutin 20 1,33 15 β-Sitosterol 3-b-O-D-glucopyranosid 500 - 3,34 16 1,4-Dihydroxy-9,10-antraquinon (Quinizanin) 100 23,63 17 5,7-Dihydroxyflavon (Chrysin) 100 19,69 18 3,5,7,3',4'-Pentametoxyflavon 3-rutinosid (Rutin) 100 3,53 19 5,7,4’-Trihydroxyisoflavon (Biochanin A) 20 73,37 20 5-Hydroxyflavon (Primuletin) 100 20,39 21 5-Hydroxythioflavon 100 21,83 22 3,7,2',4'-Tetrametoxy-5-hydroxyflavon 500 9,59 23 3,7,2',4'-Tetrametoxy-5-hydroxythioflavon 500 9,89 24 5,7,4'-Trihydroxyflavanon (Naringenin) 50 71,92 25 4'-Butyloxy-5,7-dihydroxyflavanon 50 92,60 26 4'-Butyloxy-5,7-dihydroxythioflavon 100 28,04