Đánh giá khả năng đáp ứng miễn dịch đối với protein tái tổ hợp mbp - Vt2eb trên heo

[COLOR="green"]TÓM TẮT Sử dụng kháng nguyên là protein tái tổ hợp MBP-VT2eB pha trong keo phèn với liều 50µg/heo và 75µg/heo có lập lại và không lập lại gây đáp ứng miễn dịch trên heo. Thí nghiệm được bố trí ngẫu nhiên trên 25 cá thể với 5 lô thí nghiệm. Sau đó thu kháng huyết thanh để định hiệu giá kháng thể theo 2 phương pháp: trung hòa độc tố trên tế bào vero và khuyếch tán kết tủa trên thạch. Kết quả thu được như sau: -Protein tái tổ hợp MBP-VT2eB ở liều 50µg và 75µg/heo pha trong keo phèn là loại kháng nguyên an toàn với heo. -Hoàn thiện qui trình định hiệu giá kháng huyết thanh bằng phương pháp kết tủa khuyếch tán trên thạch. -Hoàn thiện qui trình định hiệu giá kháng huyết thanh bằng phương pháp trung hòa độc tố trên tế bào vero: huyết thanh phải bất hoạt trước khi thử nghiệm và không bổ sung sodium azid vào trong huyết thanh. -Liều tiêm 50µg và 75µg/heo có lập lại và không lập lại không tạo đủ lượng kháng thể để phát hiện bằng phương pháp kết tủa khuyếch tán trên thạch và trung hòa độc tố trên tế bào vero. MỤC LỤC Tiêu đềTrang Trang bìai Trang tựaii Lời cảm ơniii Tóm tắtiv Mục lụcv Danh sách các bảngviii Danh sách các hìnhix 1. MỞ ĐẦU1 1.1. ĐẶT VẤN ĐỀ1 1.2 MỤC TIÊU VÀ YÊU CẦU1 2.TỔNG QUAN TÀI LIỆU2 2.1 VACXIN2 2.1.1 Lịch sử ra đời vacxin2 2.1.2 Đáp ứng miễn dịch 2 2.1.2.1Kháng nguyên2 2.1.2.2 Kháng thể3 2.1.2.3 Cơ chế đáp ứng miễn dịch 4 2.1.2.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến đáp ứng miễn dịch7 2.1.3 Phân loại9 2.1.3.1 Vacxin sống9 2.1.2.2 Vacxin vô hoạt10 2.1.2.3 Vacxin phân tử10 2.2 BỆNH PHÙ VÀ ĐỘC TỐ VT2e12 2.2 PROTEIN TÁI TỔ HỢP MBP-VT2eB14 2.3 PHƯƠNG PHÁP OUCHTERLONY14 2.3.1 Nguyên tắc14 2.3.2 Định tính kháng nguyên- kháng thể bằng phương pháp khuyếch tán trên thạch16 2.4 PHẢN ỨNG TRUNG HÒA ĐỘC TỐ VEROTOXIN TRÊN TẾ BÀO VERO16 2.4.1 Sơ lược về tế bào Vero 16 2.4.2 Nguyên tắc phản ứng trung hòa độc tố17 2.4.3 Đánh giá hiệu quả vacxin bệnh phù bằng phương pháp trung hoà độc tố verotoxin trên môi trường nuôi cấy tế bào vero17 3. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH18 3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM18 3.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU18 3.3 VẬT LIỆU THÍ NGHIỆM18 3.3.1 Sinh vật thí nghiệm18 3.3.2 Hóa chất thí nghiệm18 3.3.3 Dụng cụ thí nghiệm19 3.4 PHƯƠNG PHÁP20 3.4.1 Bố trí thí nghiệm20 3.4.2 Cách pha dịch tiêm20 3.4.3 Lấy máu20 3.4.4 Định tính kháng thể bằng phương pháp Ouchterlony21 3.4.5 Xác định liều TCID5022 3.4.5.1Chuẩn bị dịch độc tố22 3.4.5.2Chuẩn bị tế bào vero22 3.4.5.3Xác định liều TCID5023 3.4.6 Thực hiện phản ứng trung hòa độc tố25 3.5 Các chỉ tiêu theo dõi26 4.KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN27 4.1 CÁC TRIỆU CHỨNG CỦA HEO SAU KHI TIÊM VACXIN27 4.2 HIỆU GIÁ KHÁNG HUYẾT THANH THEO PHƯƠNG PHÁP KẾT TỦA KHUYẾCH TÁN TRÊN THẠCH27 4.2.1 Với kháng nguyên là độc tố của E. coli H2827 4.2.2 Với kháng nguyên MBP-VT2eB28 4.3 LIỀU TCID50 CỦA DỊCH LỌC VI KHUẨN27 4.4 HIỆU GIÁ KHÁNG HUYẾT THANH TRÊN MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY TẾ BÀO30 4.4.1 Đối với mẫu huyết thanh có sodium azid chưa bất hoạt30 4.4.2 Đối với mẫu huyết thanh có sodium azid và có bất hoạt31 4.4.3 Thí nghiệm chứng minh sodium azid gây chết tế bào vero33 4.4.3.1 Mẫu huyết thanh có sodium azid33 4.4.3.1 Đối với mẫu không có sodium azid33 4.4.4 Đối với mẫu huyết thanh không có sodium azid và có bất hoạt33 5.KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ36 5.1 KẾT LUẬN36 5.2 ĐỀ NGHỊ36 6.TÀI LIỆU THAM KHẢO38 7.PHỤ LỤC39 Thành phần hóa chất39 Bảng phân tích biến lượng tăng trọng heo thí nghiệm41 Bảng 3. Kết quả đo OD620nm đối với mẫu có sodium azid, có bất hoạt42 Bảng 4. Kết quả đo OD620nm đối với mẫu không có sodium azid, có bất hoạt43 DANH SÁCH CÁC BẢNG BẢNG TRANG Bảng 1. Tăng trọng của heo thí nghiệm trong thời gian thí nghiệm25 Bảng 2. Kết quả đo OD trên đĩa nuôi cấy tế bào với dịch lọc vi khuẩn27 Bảng 3. Kết quả đo OD620nm đối với mẫu có sodium azid42 Bảng 4. Kết quả đo OD620nm đối với mẫu không có sodium az DANH SÁCH CÁC HÌNH VÀ BIỂU ĐỒ HÌNH TRANG Biểu đồ 4.1 Đồ thị chuẩn độ độc tố28 Hình 2.1. Cấu trúc kháng thể3 Hình 2.2. Liên kết kháng nguyên- kháng thể15 Hình 4.1 Kết quả dương tính với huyết thanh thỏ26 Hình 4.2 Kết quả âm tính trên huyết thanh heo26 Hình 4.3 Hình tế bào vero chết do sodium azid33 Hình 4.4 Hình tế bào vero chết do độc tố33 Hình 4.5 Giếng đối chứng độc tố đã nhuộm33 Hình 4.6 Giếng đối chứng tế bào đã nhuộm33 ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH ĐỐI VỚI PROTEIN TÁI TỔ HỢP MBP-VT2eB TRÊN HEO [/COLOR]