Luận văn Nghiên cứu đặc điểm hóa sinh vì phân lập gen CHAPERONIN liên quan đến tính chịu hạn của một số giống đậu tương địa phương trồng ở vùng Tây Nguyên

prolin cao hѫn các giӕng còn lҥi và nhѭ vұy vӅ phѭѫng diӋn hóa sinh thì hai giӕng này có khҧ năng chӏu hҥn tӕt nhҩt. 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 DL ST CNg NH9 AZP Giӕng H àm lѭ ӧn g pr ol in (% k hӕ i l ѭ ӧn g Wѭ ѫ i) Trѭӟc hҥn +ҥn 3 ngày +ҥn 5 ngày +ҥn 7 ngày Hình 3.8. Hàm lѭӧng prolin cӫa 5 giӕng nghiên cӭu 3.2.2.4. Nh̵n xét v͉ kh̫ năng ch͓u h̩n ͧ gai ÿR̩n cây non 3 lá (1) Các giӕng ÿұu tѭѫng có sӵ phҧn ӭng khác nhau ÿӕi vӟi hҥn, biӇu hiӋn ӣ tӹ lӋ cây sӕng và khҧ năng giӳ nѭӟc cӫa cây. Giӕng DL có chӍ sӕ chӏu hҥn tѭѫng ÿӕi cao nhҩt ( 8972,53), thҩp nhҩt là giӕng NH9 (3529,76). Khҧ năng chӏu hҥn ӣ giai ÿoҥn cây non 3 lá cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng có thӇ xӃp theo thӭ tӵ tӯ cao ÿӃn thҩp nhѭ sau: DL > AZP > CNg > ST > NH9. 43 (2) Hàm Oѭӧng prolin ӣ thân, lá cӫa 5 giӕng nghiên cӭu tăng theo thӡi gian gây hҥn và ÿӅu cao hѫn so vӟi ÿӕi chӭng NH9. Giӕng DL và AZP có hàm lѭӧng prolin cao nhҩt, giӕng NH9 có hàm lѭӧng prolin thҩp nhҩt. (3) KӃt quҧ nghiên cӭu vӅ khҧ năng chӏu hҥn cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng ӣ giai ÿoҥn cây non 3 lá phù hӧp vӟi kӃt quҧ nghiên cӭu ӣ giai ÿRҥn hҥt nҧy mҫm. 3.2.3. Mӕi quan hӋ giӳa 5 giӕng ÿұu tѭѫng dӵa trên sӵ biӇu hiӋn cӫa các tính trҥng Mӛi giӕng ÿұu tѭѫng có mӝt kiӇu gen quy ÿӏnh mӭc phҧn ӭng ÿӕi vӟi các tác ÿӝng cӫa môi trѭӡng, dӵa trên sӵ biӇu hiӋn cӫa các tính trҥng nhѭ: hàm lѭӧng protein, hàm lѭӧng lipit, hàm lѭӧng axit amin, hàm lѭӧng prolin, tӹ lӋ thiӋt hҥi... Chúng tôi ÿã xác ÿӏnh ÿѭӧc hӋ sӕ khác nhau vӅ khҧ năng phҧn ӭng cӫa các giӕng ÿұu tѭѫng (bҧng 3.9) và sѫÿӗ hình cây (hình 3.11) mô tҧ sӵ phân nhóm cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng này bҵng chѭѫng trình NTSYS pc 2.02i. Bҧng 3.9. HӋ sӕ khác nhau giӳa 5 giӕng ÿұu tѭѫng (%) Giӕng DL ST CNg NH9 AZP DL 0,000 ST 6,697 0,000 CNg 4,756 2,012 0,000 NH9 8,161 8,175 4,548 0,000 AZP 3,857 5,175 1,157 8,918 0,000 Bҧng 3.9 cho thҩy, các giӕng ÿұu tѭѫng có khҧ năng chӏu hҥn tӕt ӣ giai ÿRҥn hҥt nҧy mҫm và cây non ÿӅu có hӋ sӕ khác nhau cao hѫn trong cһp vӟi giӕng ÿӕi chӭng NH9. ĈLӅu này phҧn ánh mӭc phҧn ӭng ÿӕi vӟi hҥn cӫa các giӕng ÿұu tѭѫng nghiên cӭu là khác nhau và sӵ khác nhau này là do kiӇu gen quy ÿӏnh. Cһp giӕng có hӋ sӕ khác nhau thҩp nhҩt là AZP- CNg (1,157%), cao nhҩt là cһp AZP- NH9 (8,918%). Hình 3.9 cho thҩy, 5 giӕng ÿұu tѭѫng phân bӕӣ 2 nhóm chính: nhóm I là giӕng DL, nhóm II phân thành 2 nhóm phө (nhóm phө I là giӕng AZP; nhóm phө II gӗm ba giӕng ST, NH9, CNg). 44 Hình 3.9. Sѫÿӗ mô tҧ mӕi quan hӋ cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng 3.3. PHÂN LҰP GEN LIÊN QUAN ĈӂN KHҦ NĂNG CHӎU HҤN Ӣ CÂY ĈҰU TѬѪNG 3.3.1. Tách chiӃt ADN tӯ hӋ gen cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng Chúng tôi sӱ dөng mҫm 3 ngày tuәi cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng ÿӇ tách chiӃt ADN tәng sӕ bao gӗm các giӕng: Duy Linh – Lâm Ĉӗng, Sa Thҫy – Kon Tum, Chѭmnga-Ĉăk Lҳk, Azѭmpa – Gia Lai và giӕng ÿӕi chӭng NH9. Mҫm ÿѭӧc tách khӓi lá mҫm, giӳӣ -85°C cho ÿӃn khi sӱ dөng. Mҫm ÿѭӧc nghiӅn thành dҥng bӝt mӏn trong cӕi chày xӭÿӇ lҥnh -85°C. ADN cӫa hӋ gen ÿѭӧc chiӃt ra khӓi tӃ bào nhӡ dung dӏch ÿӋm chiӃt có chӭa Tris HCL 1M, pH 8,0; EDTA 0,5M pH 8,0; NaCL 6M, CTAB 4%. Ĉһc biӋt vӟi ÿұu tѭѫng tӃ bào cӫa chúng chӭa nhiӅu protein nên chúng tôi xӱ lý dӏch chiӃt thu ÿѭӧc bҵng chloroform ÿӇ loҥi bӓ protein ra khӓi chӃ phҭm ADN. Tӯ 0,5g mӛi loҥi chúng tôi thu ÿѭӧc 200ml dӏch chiӃt ADN. Các mүu ADN có ÿӝ tinh sҥch ÿѭӧc kiӇm tra bҵng phѭѫng pháp quang phә hҩp thөӣ Eѭӟc sóng Ȝ = 260 nm và 280 nm ADN hҩp thөӣ bѭӟc sóng 260 nm. Sau khi xác ÿӏnh nӗng ÿӝ, chúng tôi kiӇm tra chӃ phҭm ADN bҵng phѭѫng pháp ÿiӋn di trên gel agarose 0,8%. KӃt quҧ cho thҩy, chӍ có mӝt băng chính tұp 45 trung các phân tӱ ADN, có phân tӱ lѭӧng lӟn (hình 3.10). ĈiӅu này chӭng tӓ, ADN ÿѭӧc tách chiӃt tӯ các giӕng ÿұu tѭѫng ÿӅu tѭѫng ÿӕi sҥch, không bӏÿӭt gãy, ít tҥp chҩt và ÿҧm bҧo cho viӋc sӱ dөng ÿӇ nhân bҧn gen bҵng kӻ thuұt PCR. Hình 3.10.Ҧnh ÿLӋn di ADN tәng sӕ tӯ 5 giӕng ÿұu tѭѫng M- Thang ADN chu̱n; 1- DL ;2 – ST; 3- CNg; 4 –NH9; 5 – AZP 3.3.2. Nhân gen chaperonin tӃ bào chҩt ӣ các giӕng ÿұu tѭѫng bҵng kӻ thuұt PCR Sӱ dөng ADN hӋ gen làm khuôn ÿӇ nhân gen chaperonin vӟi ÿRҥn mӗi ÿѭӧc tәng hӧp dӵa vào trình tӵ cADN cӫa chaperonin tӃ bào chҩt giӕng ÿұu tѭѫng chӏu lҥnh Nhұt Bҧn. Trên cѫ sӣ xác ÿӏnh ÿѭӧc nӗng ÿӝ khuôn tӕi ѭu cho phҧn ӭng PCR, chúng tôi ÿã tiӃn hành nhân gen chaperonin cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng (Duy Linh - Lâm Ĉӗng, Sa Thҫy - Kon Tum, Chѭmnga -Ĉҳk Lҳk và Azѭmpa – Gia Lai), mөc ÿích là xác ÿӏnh sӵ có mһt cӫa gen chaperonin cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng. Trong chu trình nhiӋt, nhiӋt ÿӝ gҳn mӗi ÿѭӧc hҥ xuӕng 550C. Ĉây là nhiӋt ÿӝ tӕi ѭu ÿӇ gҳn mӗi vào ADN cӫa hӋ gen. Sau 32 chu kǤ phҧn ӭng, sҧn phҭm PCR ÿѭӧc kiӇm tra bҵng ÿLӋn di trên gel agaroza 1% (hình 3.11). KӃt quҧ nhân gen cho thҩy, cҧ 5 giӕng ÿұu tѭѫng ÿӅu thu ÿѭӧc sҧn phҭm PCR vӟi kích thѭӟc phân tӱ là 1,6 kb. Kích thѭӟc sҧn phҭm PCR nhұn ÿѭӧc chính bҵng kích thѭӟc phân tӱ cӫa cADN gen chaperonin giӕng ÿұu tѭѫng Bonminori - Nhұt Bҧn. ĈLӅu này chӭng tӓ cҧ 5 giӕng ÿұu tѭѫng nghiên cӭu ÿӅu có gen chaperonin và không có intro trong cҩu trúc gen. Lѭӧng ADN ÿѭӧc nhân lên qua phҧn ӭng PCR ÿӫÿӇ thӵc hiӋn các nghiên cӭu tiӃp theo M 1 2 3 4 5 46 M 1 2 3 4 5 Hình 3.11. Hình ҧnh ÿLӋn di ÿRҥn gen chaperonin ÿѭӧc nhân lên bҵng kӻ thuұt PCR ӣ 5 giӕng ÿұu tѭѫng (M: Thang ADN chu̱n; 1- DL: 2- ST; 3- CNg; 4- NH9; 5- AZP) 3.3.3. Tách dòng sҧn phҭm PCR và kiӇm tra vectѫ tái tә hӧp mang ÿRҥn gen chaperonin bҵng enzym giӟi Kҥn cӫa hai giӕng ÿұu tѭѫng Duy Linh – Lâm Ĉӗng (DL) và NH9 3.3.3.1. Tách dòng V̫n pẖm PCR Fͯa hai gi͙ng ÿ̵u t˱˯ng DL và NH9 ĈӇ tҥo cѫ sӣ cho viӋc xác ÿӏnh trình tӵ gen chaperonin Fӫa hai giӕng ÿұu tѭѫng trên sau khi ÿã nhân ÿѭӧc mӝt sӕ lѭӧng lӟn ÿRҥn gen này bҵng Nӻ thuұt PCR. Chúng tôi tiӃn hành tách dòng phân tӱ ÿRҥn gen ÿã nhân vӟi viӋc sӱ dөng vetѫ tách dòng Pjet 1.2. Tách dòng ÿѭӧc thӵc hiӋn bҵng cách gҳn trӵc tiӃp sҧn phҭm PCR vào vectѫ tách dòng plasmit Pjet 1.2 sau ÿó biӃn nҥp vào chӫng E. coli và cҩy trên môi trѭӡng chӑn lӑc có ampixillin. Trên môi trѭӡng này, chúng tôi ÿã thu ÿѭӧc nhiӅu khuҭn Oҥc trҳng và mӝt sӕ khuҭn Oҥc xanh. Theo lý thuyӃt, các khuҭn Oҥc trҳng ÿѭӧc Wҥo ra tӯ các tӃ bào mang vetѫ có gҳn ADN ngoҥi lai. Nhҵm xác ÿӏnh chính xác khuҭn Oҥc ÿó có mang Vҧn phҭm PCR mong muӕn hay không, chúng tôi tiӃn hành tách chiӃt ADN plasmit Fӫa mӝt sӕ khuҭn Oҥc trҳng và chӑn ÿѭӧc 3 khuҭn lҥc pCR9(DL), pCR11(DL), pCR15(NH9) có ADN plasmit vӟi ÿӝ di ÿӝng ÿiӋn di cao hѫn ÿӕi chӭng. 3.3.3.2. Ki͋m tra vet˯ tái t͝ hͫp mang ÿR̩n gen chaperonin b̹ng enzym giͣi K̩n ĈӇ kiӇm tra kích thѭӟc thӵc tӃ cӫa ÿRҥn ADN xen vào, chúng tôi tiӃn hành cҳt kiӇm tra các mүu ADN plasmit thu ÿѭӧc bҵng enzym EcoRI. 9ӏ trí cӫa enzym 1.6kb 47 này trong plasmit Pjet 1.2 nҵm ӣ 2 bên Fӫa ÿRҥn gҳn. NӃu vectѫ tái tә hӧp gҳn ÿѭѫFҕ ÿRҥn gen mong muӕn thì sau khi cҳt bҵng enzym giӟi Kҥn plasmit tái tә hӧp VӁ văng ra mӝt ÿRҥn ADN dài khoҧng 1,6kb. KӃt quҧÿLӋn di sau khi cҳt cho thҩy, ÿRҥn ADN ÿѭӧc cҳt văng ra khӓi vectѫ tái tә hӧp có KTPT 1,6 kb tѭѫng ӭng vӟi kích thѭӟc cӫa ÿoҥn gen chaperonin cҫn tách dòng. Vì vұy, có thӇ khҷng ÿӏnh rҵng chúng tôi ÿã chӑn ÿѭӧc 3 dòng plasmit tái tә hӧp (2,3) cӫa mүu DL và 1 dòng plasmit tái tә hӧp (4) cӫa mүu NH9 có chӭa ÿoҥn chaperonin có kích thѭӟc 1,6 kb (hình 3.12). Hình 3.12. ĈiӋn di Vҧn phҭm cҳt các plasmit tái tә hӧp bҵng enzym giӟi Kҥn M: Marker kích th˱ͣc phân t͵; 1: Plasmit ÿ͙i chͱng âm; 2: plasmit pDL- Chap1; 3: Plasmit Pdl - Chap2; 4: Plasmit pNH9 3.3.4. KӃt quҧ giҧi trình tӵ nucleotit cӫa gen chaperonin cӫa hai giӕng ÿұu Wѭѫng DL và NH9 Trình tӵ gen chaperonin cӫa hai giӕng ÿұu tѭѫng DL và NH9 ÿѭӧc tiӃn hành xác ÿӏnh theo phѭѫng pháp Sanger trên máy xác ÿӏnh trình tӵ ADN tӵÿӝng ABI PRISM 3100 Avant Genetic Analizer. ĈӇ kiӇm tra kӃt quҧ ÿӑc trình tӵ gen chaperonin, sӱ dөng phҫn mӅm sinh Kӑc Clustal ÿӇ so sánh trình tӵ gen này vӟi các trình gen chaperonin cӫa giӕng ÿұu tѭѫng chӏu lҥnh Bominori – Nhұt Bҧn, giӕng ÿӝt biӃn chӏu nóng M103 và giӕng ÿұu tѭѫng ÿӏa phѭѫng chӏu hҥn Cúc Vàng (CV) (hình 3.13). M 1 2 3 4 1,6kb 48 10 20 30 40 50 60 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 ATGTCGGCAA TCGCGGCTCC CCAACACAGA TCCTCGAAGA CAGAGTCCTA CGTGGACAAT M103 .......... .......... ...G...... .......... .......... ...T.....C Cuc vang .......... .......... ...G...C.. .......... .G........ ...T.....C DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... .......... ...G...C.. .......... .G........ ...T.....C NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 70 80 90 100 110 120 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 AAGCGCAAGG AGGATATCCG CCATGCCAAC ATCGTGGCCG CACGCTCAGT CGCCAACGCG M103 .......... .T..C..... ...C..G... .......... .......C.. .......... Cuc vang .......... .T..C..... ...C...... .......... .......C.. .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... .T..C..... ...C...... .......... .......C.. .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 130 140 150 160 170 180 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 GTTCGCACCA GTCTGGGCCC TAAGGGCATG GACAAGATGA TCTCCACCTC CTCCGACGAG M103 .......... .......... .......... .......... .......... .......... Cuc vang .......... .......... C......... .......... C......... .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... .......... C......... .......... .......... .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 190 200 210 220 230 240 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 GTCATCATCA CCAACGACGG CGCCACCATC CTCAACAAGA TGCAGGTCCT CCAGCCCGCC M103 .......... ....T..... .......... .......... .......... .......... Cuc vang .......... ....T..... .......... ..T....... ......G... ......G... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... LD-CHAP2 .......... ....T..... .......... .......... .......... .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 250 260 270 280 290 300 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 GCCAAGATGC TCGTCGAGCT CTCCAAGTCC CAGGACTCCG CCGCCGGCGA CGGCAGCACC M103 .......... .......... .......... .......... .......... .....C...T Cuc vang .......... .......... .......... .......... .......... .....C..TT DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .....C.... DL-CHAP2 .......... .......... .......... .......... .......... .....C...T NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .....C.... 49 310 320 330 340 350 360 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 ACCGTCGTCG TCATCGCTGG CGCCCTCCAC GAGCAGTGCC TCCTCCTCCT TTCCCACGGC M103 .......... ....T..... .......... .......... .......... C......... Cuc vang .......... .......... ........T. .......... .......... .......... DL-CHAP1 .......... .......... ........T. .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... ....T..... ........T. .......... .......... C......... NH9 .......... .......... ........T. .......... .........C .......... 370 380 390 400 410 420 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 ATCCACCCCA CCGTCGTCTC CGAGCCCCTC CACAAGGCTG CCGTCAAGGC CGTTGACGTT M103 .......... .......... ...CGG.... .......... ....G..... ...C...... Cuc vang .......... .......... ...CG..... .......... .......... ...C...... DL-CHAP1 .......... .......... ...CG..... .......... .......... ...C...... DL-CHAP2 .......... .......... ...CG..... .......... ....G..... ...C...... NH9 .......... .......... ...CG..... .......... .......... ...C...... 430 440 450 460 470 480 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 CTCACCGCCA TGGCCGTCCC CGTCGAACTC TCCGACCGCG ACTCCCTCGT GAAGTCCGCC M103 .......... .......... ......G... .......... .......... .......... Cuc vang .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... .......... ......G... ..T....... .......... .........T NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 490 500 510 520 530 540 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 AGCACTTCCC TCAACAGCAA GGTCGTCAGC CAATACTCCA CGCTCCTCGC TCCCCTCGCC M103 .....A.... .......... .......... ..G....... .......G.. .......... Cuc vang .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .....A.... .......... .......... ..G....... .......G.. .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 550 560 570 580 590 600 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 GTCGACGCCG TTCTCTCCGT CGTGGATGCC CCCAAGCCCG ACATGGTCGA TCTCCGCGAT M103 .......... .......... .......... .......... .......... ......G... Cuc vang .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... ....T..... ...C...... G......... .......... C......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 50 610 620 630 640 650 660 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 GTCAAGATCG TGAAGAAACT CGGCGGCACC GTCGACGACA CCGAGCTCGT GAAAGGTCTC M103 ..G....... .......G.. .......... .......... .......... .......... Cuc vang .........T .......... .......... .......... .......... C.......C. DL-CHAP1 .......... ......G... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 ..G....... .......G.. .......... .......... .......... .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 670 680 690 700 710 720 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 GTCTTTGACA AGAAGGTCAG CCACGCCGCC GGGGGACCCA CCCGCATGGA GAACGCCAAG M103 .......... .......... .......... .......... .......... .......... Cuc vang .......... .......... .......... ..T....... .......... .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... .......... .......... ..T....... .......... .......... NH9 .......... .......... .......... .......... ......C... .......... 730 740 750 760 770 780 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 ATCGCCGTCA TTCAATTCCA GATTTCGCCG CCCAAAACCG ACATCGAACA GAGCATTGTG M103 .......... .......... .........T ........A. .......... .......... Cuc vang .......... .A..G..... .........T ........A. .......... .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... .A..G....G .........T ........A. .......... .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 790 800 810 820 830 840 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 GTGAGTGATT ACTCTCAGAT GGATAGGATT CTAAAAGAAG AGCGTAGTTA TATTCTCAGC M103 .......... .......... .......... .....G.... .......... .......G.. Cuc vang .......... .......... .......... .....G.... .......... .......G.. DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... .......... .......... .....G.... .......... .......G.. NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 850 860 870 880 890 900 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 ATGATTAAGA AGATCAAGGC CACTGGTTGT AATGTGTTGT TGATTCAGAA GAGTATTTTG M103 .......... .......... .......... .......... .......... .......... Cuc vang .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... .......... .......... .......... .......... .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 51 910 920 930 940 950 960 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 AGGGATGCGG TTACTGATTT GTCCTTGCAT TACCTTGCAA AAGCTAAGAT TTTGGTCATT M103 .......... .......... .G........ ........C. .......... .......... Cuc vang ........T. .......... .......... ........C. .......... .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 ........T. .......... .......... ........C. .......... .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 970 980 990 1000 1010 1020 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 AAGGATGTGG AGAGGGATGA GATTGAGTTC ATTACCAAGA CACTGAATTG TTTGCCCATT M103 .......... .......... .......... .......... .......... .......... Cuc vang .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... .......... .......... .......... .......... .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 1030 1040 1050 1060 1070 1080 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 GCTAACATTG AGCATTTTCG CACTGAGAAG TTGGGTTATG CTGATCTTGT GGAAGAGTTT M103 .......... .......... .......... .......... .......... .......... Cuc vang .......... .......... .......... ........C. .......... .......G.. DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... ........C. .......... .......G.. NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 1090 1100 1110 1120 1130 1140 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 TCTCTTGGGG ATGGGAAGAT TGTGAAGATT ACTGGTATTA AGGAGATGGG GAAGACCACC M103 .......... .......... .......... .....G.... .......... .......... Cuc vang .......... .......... .......... .....G.... .......... .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... .......... .......... .....G.... .......... .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 1150 1160 1170 1180 1190 1200 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 ACTGTGCTTG TACGTGGGTC TAATCAGCTT GTGCTCGATG AGGCTGAGCG GAGTTTGCAC M103 .......... .......... .......... .......... .......... .......... Cuc vang .......... .......... .......... ..T....... ....C...A. .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... .......... .......... ..T....... ....C...A. .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 52 1210 1220 1230 1240 1250 1260 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 GATGCTTTGT GTGTTGTTAG GTGTTTGGTT GCCAAGAGGT TTCTCATTGC CGGCGGTGGT M103 .......... .......... .......... .......... .......... .......... Cuc vang .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... .......... .......... .......... .......... .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 1270 1280 1290 1300 1310 1320 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 GCCCCTGAGA TTGAGCTCTC CAGGCAGCTG GGTGCCTGGG CTAAGGTGTT GCATGGGATG M103 .......... .......... .......... .......... .......... .......... Cuc vang ..G....... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 ..G....... .......... .......... .......... .......... .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 1330 1340 1350 1360 1370 1380 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 GAGGGTTACT GTGTGAGGGC ATTCGCTGAG GCGCTTGAAG TTATTCCCTA TACTCTGGCT M103 .......... .......... ...T...... .......... .......... .......... Cuc vang .......... .......... ...T...... .......... .......... .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... .......... ...T...... .......... .......... .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 1390 1400 1410 1420 1430 1440 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 GAAAATGCTG GTTTGAACCC GATTGCCATT GTTACTGAGC TAAGGAATCG TCATGCACAG M103 .......... .......... .......... .....C.... .G........ .......... Cuc vang ..G....... .......... .......... .....C.... .G........ .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 ..G....... .......... .......... .....C.... .G........ .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 1450 1460 1470 1480 1490 1500 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 GGTGAGATAA ATGCTGGAAT AAATGTAAGG AAGGGGCAGA TTACCAACAT CTTGGAGGAG M103 .......... .......... ......G... .....T.... .......... .......... Cuc vang .......... .......... ......G... .....T.... .......... .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... .......... ......G... .....T.... .......... .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 53 1510 1520 1530 1540 1550 1560 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| AB004233 AATGTGGTGC AGCCCCTGCT TGTGAGCACC AGTGCGATCA CCTTGGCGAC AGAGTGTGTG M103 .......... ......CT.. ...T...... .......... .......... .......... Cuc vang .......... .......T.. ...T.....A .......... TG........ .......... DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .......... .......... DL-CHAP2 .......... .......T.. ...T.....A .......... TG........ .......... NH9 .......... .......... .......... .......... .......... .......... 1570 1580 1590 1600 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| .. AB004233 CGGATGATTT TGAAGATTGA TGATATTGTA ACTGTGAGGT AG M103 .......... .......... .......... .......... .. Cuc vang .......... .......... .......... .......... .. DL-CHAP1 .......... .......... .......... .......... .. DL-CHAP2 .......... .......... .......... .......... .. NH9 .......... .......... .......... .......... .. Hình 3.13. Trình tӵ gien chaperonin tӃ bào chҩt Fӫa giӕng ÿұu tѭѫng DL, giӕng NH9, giӕng ÿұu tѭѫng chӏu Kҥn Cúc Vàng, giӕng ÿӝt biӃn M103 và giӕng ÿұu tѭѫng chӏu Oҥnh Nhұt %ҧn – Bonminori. Tӯ giӕng DL nhân ÿѭӧc 2 gen khác nhau (chaperonin là hӑ gen), chúng tôi ÿһt tên là DL-Chap1 và DL-Chap2. Thӕng kê các ÿiӇm thay ÿәi Yӏ trí nucleotit gen chaperonin Fӫa DL- Chap1, DL- Chap2 và giӕng NH9 so vӟi cADN Fӫa giӕng Bonminori (AB004233) Nhұt %ҧn ÿѭӧc thӇ hiӋn trên Eҧng 3.10. %ҧng 3.10. Thӕng kê các Yӏ trí nucleotit thay ÿәi trong gen chaperonin DL- Chap 1, DL- Chap2 và NH9 so vӟi Bonminori – Nhұt %ҧn STT Ký hiӋu giӕng 9ӏ trí nucleotit thay ÿәi 1 DL- Chap1 G196C, A329T, G384C, C385G, T114C, A617G 2 DL- Chap2 A24G, A28C, A42G, G54C, T60G, G72T, T75G,T84C, A108C, T141C, C195T, G196C, C300T, C315T, A329T, T351C, G384C, C385G, C405G, T414C, A447G, C453T, C480T, T486A, A513G, C528G, C555T, G564C, C571G, T591C, C603G, A618G, G693T, T732A, A735G, A740G, G750T, C759A, A816G, A838G, G909T, A939C, T1059C, T1078G, T1116G, G1173T, T1185C, C1189A, C1263G, C1344T, A1383G, T1416C, A1422G, A1467G, G1476T, G1518T, G1524T, C1530A, C1541T, C1542G 3 NH9 G296C, A329T, T350C, G384C, C385G, T414C, T707C 54 Tӯ kӃt quҧ thӕng kê chúng tôi thҩy. So sánh vӟi gen chapronin cӫa giӕng ÿұu tѭѫng Bonminori- Nhұt %ҧn, thì gen chaperonin DL- Chap1 có tӹ lӋ tѭѫng ÿӗng là 99,68% (vӟi 6 Yӏ trí nucleotit và 5 Yӏ trí axit amin thay ÿәi). Gen chaperonin DL- Chap2 có tӹ lӋ tѭѫng ÿӗng 96,25% (vӟi 60 Yӏ trí nucleotit và 10 Yӏ trí axit amin thay ÿәi). Trình tӵ gien chaperonin Fӫa giӕng NH9 có tӹ lӋ tѭѫng ÿӗng 99,56% (vӟi 7 Yӏ trí nucleotit và 6 axit amin thay ÿәi). Còn so vӟi giӕng ÿұu tѭѫng chӏu nóng M103 thӕng kê tѭѫng tӵ , gen chaperonin Fӫa DL- Chap1 có tӹ lӋ tѭѫng ÿӗng là 97,81% (vӟi 35 Yӏ trí nucleotit và 6 axit amin thay ÿәi). Gen chaperonin cӫa DL- Chap2 có Wӹ lӋ Wѭѫng ÿӗng 99,06% (vӟi 15 vӏ trí nucleotit và 7 axit amin thay ÿәi). Chaperonin giӕng NH9 có tӹ lӋ tѭѫng ÿӗng 97,94% (vӟi 33 vӏ trí nucleotit và 7 axit amin thay ÿәi). Vӟi trình tӵ gen Fӫa giӕng Cúc Vàng: DL- Chap1 có tӹ lӋ ÿӗng nhҩt 97,06% ( vӟi 47 Yӏ trí nucleotit và 9 Yӏ trí axit amin thay ÿәi). DL- Chap2 có tӹ lӋ ÿӗng nhҩt 98,74% ( vӟi 20 Yӏ trí nucleotit và 5 axit amim thay ÿәi) và giӕng NH9 có tӹ lӋ ÿӗng nhҩt 97,06% ( vӟi 47 Yӏ trí nucleotit và 10 axit amin thay ÿәi). 9ӏ trí các axit amin thay ÿәi Fӫa 5 trình tӵ gen trên ÿѭӧc trình bày trong Eҧng 3.11. Tӯ bҧng 3.11, chúng tôi so sánh vӟi trình tӵ axit amin Fӫa giӕng ÿұu tѭѫng Bonminori thì trình tӵ axit amin Fӫa gen chaperonin DL- Chap1, DL- Chap2 và NH9 có sӵ thay ÿәi mӝt sӕ vӏ trí tѭѫng tӵ nhѭ giӕng chӏu Kҥn Cúc Vàng và giӕng chӏu nóng M103. &ө thӇ, ӣ giӕng chӏu Oҥnh Bonminori có Ser 99 ® Thr (DL- Chap1, DL- Chap2, NH9, Cúc vàng và M103). Giӕng Bonminori Yӏ trí 128 Glu ® Asp (DL- Chap1, DL- Chap2, NH9, Cúc Vàng và M103). Ngoài ra, ӣ vӏ trí 110 His ® Leu 110 (DL- Chap1, DL- Chap2, NH9, Cúc Vàng và M103). Ӣ vӏ trí 129 Pro ® Ala (DL- Chap1, DL- Chap2, NH9 và Cúc vàng). 55 %ҧng 3.11 Trình tӵ axit amin Fӫa gen chaperonin thay ÿәi ӣ các giӕng ÿұu tѭѫng TT 9ӏ trí Boniminori M103 Cúc Vàng DL- Chap1 DL-Chap2 NH9 1 24 Glu (E) Asp (D) Asp (D) Glu (E) Asp (D) Glu (E) 2 54 Ile (I) Ile (I) Thr (T) Ile (I) Ile (I) Ile(I) 3 76 Val (V) Val (V) Gly (G) Val (V) Val (V) Val (V) 4 99 Ser (S) Thr (T) Thr (T) Thr (T) Thr (T) Thr (T) 5 100 Thr (T) Ile(I) Thr (T) Thr (T) Thr (T) Thr (T) 6 110 His (H) Leu (L) Leu (L) Leu (L) Leu (L) Leu (L) 7 117 Leu (L) Leu (L) Leu (L) Leu (L) Leu (L) Pro (P) 8 128 Glu (E) Asp (D) Asp (D) Asp (D) Asp (D) Asp (D) 9 129 Pro (P) Gly (G) Ala (A) Ala (A) Ala (A) Ala (A) 10 191 Pro (P) Pro (P) Pro (P) Pro (P) Ala (A) Pro (P) 11 204 Val (V) Val (V) Leu (L) Val (V) Val (V) Val (V) 12 206 Lys (K) Lys (K) Lys (K) Arg (R) Lys (K) Lys (K) 13 220 Leu (L) Leu (L) Pro (P) Leu (L) Leu (L) Leu (L) 14 236 Met (M) Met (M) Met (M) Met (M) Met (M) Thr (T) 15 247 Gln (Q) Gln (Q) Gln (Q) Gln (Q) Arg (R) Gln (Q) 16 280 Ser (S) Gly (G) Gly (G) Ser (S) Gly (G) Ser (S) 17 308 Ser (S) Ala (A) Ser (S) Ser (S) Ser (S) Ser (S) 18 360 Phe (F) Phe (F) Val (V) Phe (F) Val (V) Phe (F) 19 506 Leu (L) Pro (P) Leu (L) Leu (L) Leu (L) Leu (L) 20 514 Thr (T) Thr (T) Met (M) Thr (T) Met (M) Thr (T) 56 Trình tӵ axit amin gen chaperonin Fӫa giӕng Cúc Vàng có 12 Yӏ trí axit amin thay ÿәi so vӟi giӕng ÿұu tѭѫng chӏu Oҥnh Bonminori. Còn gen chaperonin Fӫa DL- Chap2 có 10 Yӏ trí axit amin thay ÿәi, trong ÿó có 7 Yӏ trí thay ÿәi hoàn toàn giӕng vӟi Cúc Vàng là giӕng ÿұu tѭѫng ÿã ÿѭӧc ÿánh giá là có khҧ năng chӏu Kҥn. Ĉһc biӋt, có 2 Yӏ trí Ser99® Thr, Ser 280 ® Gly ҕtuân theo quy luұt tăng khҧ năng chӏu nhiӋt. Trong cҩu trúc phân tӱ cӫa gen chaperonin có 3 vùng chӭc năng. - Vùng hoҥt tính ATPaza là vùng bҧo thӫ ít thay ÿәi. - Vùng gҳn vӟi ATP, ÿây là vùng tѭѫng ÿӕi bҧo thӫ nҵm ӣ vӏ trí axit amin tӯ (Gly96 ÿӃn Vall102 ӣÿұu tѭѫng). Trong vùng này gen chaperonin giӕng Bonminori - Nhұt Bҧn có axit amin 99 là Ser, cNJng ӣ vӏ trí này DL- Chap2 thay bҵng Thr. - Vùng gҳn cѫ chҩt phӭc CCT tҥi ví trí ÿӍnh cӫa chaperonin tӃ bào chҩt, nҵm ӣ vӏ trí axit amin (Glu 209 ÿӃn Leu 306 ӣ ÿұu tѭѫng). Trong vùng này gen chaperonin Bonminori có vӏ trí axit amin 280 là Ser, còn ӣ vӏ trí này DL- Chap2 thay bҵng Gly. Hai vӏ trí axit amin thay ÿәi ӣ trình tӵ gen chaperonin cӫa DL- Chap2 trong 2 vùng chӭc năng trên tuân theo quy luұt biӃn ÿәi Fӫa các enzym chӏu nhiêt. Cѫ chҩt chӫ yӃu cӫa chaperonin tӃ bào chҩt là các protein tҥo khung tӃ bào: tubulin và actin [19]. Vұy, sӵ thay ÿәi axit amin theo khҧ năng chӏu nhiӋt cӫa protein này có thӇ là nguyên nhân tҥo ra tính chӏu hҥn cӫa giӕng DL. Tuy nhiên ÿӇ khҷng ÿӏnh ÿLӅu này cҫn phҧi nghiên cӭu sâu hѫn vӅ cҩu trúc và sӵ biӇu hiӋn cӫa protein trên. 57 .ӂT LUҰN VÀ Ĉӄ NGHӎ 1. KӂT LUҰN 1.1.Các giӕng ÿұu tѭѫng ÿӏa phѭѫng cӫa vùng Tây Nguyên có sӵÿa dҥng và phong phú vӅ hình thái, kích thѭӟc và khӕi lѭӧng hҥt. Giӕng có khӕi lѭӧng 1000 hҥt cao nhҩt là giӕng ÿӕi chӭng NH9 (145,34g ± 0,04) thҩp nhҩt là giӕng ÿӏa phѭѫng Duy Linh – Lâm Ĉӗng (65,26g ± 0,34). 1.2 Hàm lѭӧng protein trong hҥt cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng dao ÿӝng tӯ 33,12% ÿӃn 38,35%, còn hàm lѭӧng lipit dao ÿӝng trong khoҧng tӯ 12,53% ÿӃn 18,33%. Hàm lѭӧng protein và lipit trong hҥt có mӕi tѭѫng quan nghӏch. 1.3. Ĉã xác ÿӏnh ÿѭӧc 17 loҥi axit amin trong hҥt cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng nghiên cӭu, trong ÿó có 7 loҥi axit amin không thay thӃ. 1.4. Hàm lѭӧng protein tan và hoҥt ÿӝ proteaza ӣ giai ÿRҥn hҥt nҭy mҫm cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng có mӕi tѭѫng quan thuұn, liên quan ÿӃn khҧ năng chӏu hҥn cӫa tӯng giӕng. Giӕng DL có khҧ năng chӏu hҥn tӕt nhҩt sau ÿó là giӕng AZP, CNg, ST và cuӕi cùng là giӕng NH9. 1.5.Các giӕng ÿұu tѭѫng nghiên cӭu có phҧn ӭng khác nhau ÿӕi vӟi hҥn, biӇu hiӋn ӣ tӹ lӋ cây sӕng và khҧ năng giӳ nѭӟc cӫa cây. Giӕng DL có chӍ sӕ chӏu hҥn tѭѫng ÿӕi cao nhҩt ( 8972,53), thҩp nhҩt là giӕng NH9 (3529,76). Khҧ năng chӏu hҥn ӣ giai ÿRҥn cây non 3 lá cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng có thӇ xӃp theo thӭ tӵ tӯ cao ÿӃn thҩp nhѭ sau: DL > AZP > CNg > ST > NH9. Hàm lѭӧng prolin ӣ thân, lá cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng ӣ giai ÿRҥn cây non 3 lá ÿӅu tăng theo thӡi gian gây hҥn. 1.6. Ĉã xác ÿӏnh ÿѭӧc sӵ có mһt cӫa gen chaperonin tӃ bào chҩt vӟi kích thѭӟc phân tӱ khoҧng 1,6 kb tӯ 5 giӕng ÿұu tѭѫng nghiên cӭu. 1.7. Ĉã tách dòng và xác ÿӏnh ÿѭӧc trình tӵ gen chaperonin tӃ bào chҩt tӯ giӕng ÿұu tѭѫng ÿӏa phѭѫng Duy Linh – Lâm Ĉӗng gӗm 2 gen (DL- Chap1, DL- Chap2) và giӕng ÿӕi chӭng NH9. Trình tӵ gӗm 1602 nucleotit mã hóa cho 533 axit amin. 58 Gen chaperonin DL- Chap2 có 6 Yӏ trí axit amin thay ÿәi so vӟi Bominori- Nhұt %ҧn và 6 Yӏ trí thay ÿәi này tѭѫng tӵ nhѭ gen chaperonin Fӫa giӕng chӏu Kҥn Cúc Vàng. Trong ÿó có 2 Yӏ trí Ser99® Thr, Ser 280 ® Gly theo quy luұt biӃn ÿәi Fӫa các enzym chӏu nhiӋt. 2. Ĉӄ NGHӎ 1.1. Trên cѫ sӣ các kӃt quҧ nghiên cӭu cӫa luұn văn, có thӇ tiӃp tөc mӣ rӝng các nghiên cӭu vӅ các nhóm gen khác có liên quan ÿӃn tính chӏu hҥn nhѭ: dehydrin, HSP… ÿӕi vӟi cây ÿұu tѭѫng. 1.2. Giӕng ÿұu tѭѫng ÿӏa phѭѫng Duy Linh - Lâm Ĉӗng có chҩt lѭӧng hҥt tӕt và có khҧ năng chӏu hҥn, có thӇ sӱ dөng làm vұt liӋu cho chӑn tҥo giӕng mӟi. 59 TÀI LIӊU THAM KHҦO PHҪN TIӂNG VIӊT 1. Lê Trҫn Bình và cs (1997), Công ngh͏ sinh h͕c th͹c v̵t trong c̫i ti͇n gi͙ng cây tr͛ng, Giáo trình cao hӑc nông nghiӋp, NXB Nông nghiӋp Hà Nӝi. 2. Lê Trҫn Bình , Lê Thӏ Muӝi (1998), Phân l̵p gen và ch͕n dòng ch͙ng ch͓u ngo̩i c̫nh b̭t lͫi ͧ cây lúa, Nxb Ĉҥi hӑc Quӕc gia, Hà Nӝi. 3. Phҥm Thӏ Trân Châu, NguyӉn Thӏ HiӅn ,Phùng Gia Tѭӡng (1998), Th͹c hành hoá sinh h͕c, NXB Giáo dөc, 54 -55. 4. NguyӉn Hӳu Cѭӡng, NguyӉn Thӏ Kim Anh, Ĉinh Thӏ Phòng, Lê Thӏ Muӝi, Lê Trҫn Bình (2003), "Mӕi tѭѫng quan giӳa hàm lѭӧng proline và tính chӕng chӏu ӣ cây lúa ”, T̩p chí Công Ngh͏ sinh h͕c, 1(1), Tr 85 – 95. 5. Ngô ThӃ Dân, NguyӉn Xuân Hӗng, Ĉӛ Thӏ Dung, NguyӉn Thӏ Chinh, Trҫn Ĉình Long, NguyӉn ThӏĈào, Phҥm Văn Toҧn, Gowda C. L. L (2000), KͿ thu̵t ÿ̩t năng sṷt l̩c cao ͧ Vi͏t Nam, NXB Nông nghiӋp, Hà Nӝi. 6. NguyӉn Thӏ Kim Dung ( 2003), Nghiên cͱu hi͏n t˱ͫng ÿa hình protein và m͡t s͙ ch͑ tiêu hóa sinh cͯa các gi͙ng l̩c, Luұn văn thҥc sƭ sinh hӑc, trѭӡng Ĉҥi hӑc sѭ phҥm, Ĉҥi hӑc Thái Nguyên. 7. Lê Song Dӵ, NguyӉn ThӃ Côn (1979), Giáo trình cây l̩c. NXB Nông nghiӋp, Hà Nӝi 8. Lê Doãn Diên, Trѭѫng Văn ĈӃn, NguyӉn Bá Trinh (1989), Nâng cao ch̭t O˱ͫng nông s̫n, tұp 2, ( Ĉұu tѭѫng), NXB Nông nghiӋp, Hà Nӝi, 9. Hoàng Văn Ĉӭc, K͇t qu̫ nghiên cͱu qu͙c t͇ v͉ÿ͟ t˱˯ng, NXB Nông nghiӋp, Hà Nӝi, 1986. 10. NguyӉn Huy Hoàng (1992), Nghiên cͱu kh̫ năng ch͓u h̩n cͯa các gi͙ng ÿ̵u t˱˯ng nh̵p n͡i ͧ mi͉n B̷c Vi͏t Nam, Luұn án phó tiӃn sƭ, Hà Nӝi. 11. NguyӉn Thu HiӅn (2005), Nghiên cͱu ÿ̿c ÿi͋m hóa sinh vf phân l̵p gen dehydrin liên quan ÿ͇n kh̫ năng ch͓u K̩n Fͯa m͡t s͙ gi͙ng ÿ̵u t˱˯ng ÿ͓a ph˱˯ng vùng núi phía B̷c Vi͏t nam”, Luұn văn thҥc Vƭ sinh Kӑc, trѭӡng Ĉҥi Kӑc sѭ phҥm, Ĉҥi Kӑc Thái Nguyên. 60 12. Nông Văn +ҧi, Arahira M, Phan Văn Chi, Kim CS, Zhang D, Udaka K, Fukazawa C (1997), Glycine max cct-d gene (cDNA) for group II- chaperonin delta-subunit complete cds . Genbank/EBI/DDBJ databases, Acc. No AB004233. 13. NguyӉn Ĉăng Khôi (1997), “Các cây ÿ̵u ăn h̩t ͧ Vi͏t Nam”, Tҥp chí Sinh hӑc, 19, N02, tr. 5-10. 14. Trҫn Văn Lài (1995), Thu th̵p, ÿánh giá và b̫o qu̫n ngu͛n th͹c li͏u di truy͉n ÿ̵u ÿ͟, KӃt quҧ nghiên cӭu khoa hӑc cây ÿұu ÿӛ 1991- 1995, Hà Nӝi 9- 1995, tr. 5-6 15. Trҫn Thӏ Phѭѫng Liên, Nông Văn Hҧi, Lê Thӏ Muӝi (1996), Nghiên cͱu proteaza và s͹ phânn hͯy protein trong quá trình ṉy m̯m cͯa h̩t gi͙ng ÿ̵u W˱˯ng M103, Kӹ yӃu ViӋn công nghӋ sinh hӑc 1996, NXB Khoa hӑc và kӻ thuұt, tr. 54-58. 16. Trҫn Thӏ Phѭѫng Liên, NguyӉn Huy Hoàng, Ĉinh Duy Kháng, Nông Văn Hҧi, Lê Thӏ Muӝi (1998), ” Phân lұp gen chaperonin ӣ giӕng ÿұu tѭѫng chӏu nóng M103 ”, T̩p chí khoa h͕c công ngh͏, 36(5), 8 – 14 17. Trҫn Thӏ Phѭѫng Liên, Lê Thӏ Thu HiӅn, NguyӉn Ĉăng Tôn, Cao Xuân HiӃu, Nông Văn +ҧi, Lê ThӏMuӝi, Trҫn Ĉình Long (2003), Nghiên cͱu s͹ ÿa G̩ng Fͯa gen chaperonin CCTdͧ cây ÿ̵u t˱˯ng, 7ҥp chí Sinh Kӑc 25 (3): 77- 82. 18. Trҫn Thӏ Phѭѫng Liên (1999), Nghiên cͱu ÿ̿c tính hoá sinh và sinh h͕c phân t͵ cͯa m͡t s͙ gi͙ng ÿ̵u t˱˯ng có kh̫ năng ch͓u nóng, ch͓u h̩n ͧ Vi͏t Nam, Luұn án tiӃn sƭ sinh hӑc, ViӋn công nghӋ sinh hӑc, Hà Nӝi 19. Trҫn Thӏ Phѭѫng Liên ( 2006), Bài giҧng – Proteinliên quan ÿ͇n tính ch͙ng ch͓u. 20. Trҫn Ĉình Long (2000), Cây ÿ̵u t˱˯ng, NXB Nông NghiӋp 21. Trҫn Ĉình Long, NguyӉn Thӏ Chinh, Hoàng Minh Tâm, NguyӉn Văn Thҳng, Lê Khҧ Tѭӡng, Trҫn Thӏ Trѭӡng và cs,K͇t qu̫ nghiên cͱu và phát tri͋n ÿ̵u ÿͧ͟ Vi͏t Nam (giai ÿR̩n 2001-2005), ViӋn khoa hӑc Nông nghiӋp ViӋt Nam. 22. Chu Văn Mүn ( 2001), Ͱng dͭng tin h͕c trong sinh h͕c, NXB Ĉҥi hӑc Khoa hӑc Tӵ nhiên, Hà Nӝi,. 61 23. Chu Hoàng Mұu, Nông Thӏ Man, Lê Trҫn Bình (2000), “Ĉánh giá m͡t s͙ tính tr̩ng kinh t͇ quan tr͕ng và kh̫ năng ch͓u h̩n cͯa các dòng ÿ̵u t˱˯ng (Glycine max (L.) Merrill) ÿ͡t bi͇n”, Tҥp chí khoa hӑc và công nghӋ, 1(13), Ĉҥi hӑc Thái Nguyên, 16-21. 24. Chu Hoàng Mұu (2001), S͵ dͭng ph˱˯ng pháp ÿ͡t bi͇n th͹c nghi͏m ÿ͋ t̩o các dòng ÿ̵u t˱˯ng và ÿ̵u xanh thích hͫp cho mi͉n núi Ĉông B̷c Vi͏t Nam, Luұn án tiӃn sƭ sinh hӑc, ViӋn công nghӋ sinh hӑc, Hà Nӝi 25. Chu Hoàng Mұu ( 2005), C˯ sͧ và ph˱˯ng pháp sinh h͕c phân t͵, NXB Ĉҥi hӑc Sѭ phҥm. 26. Chu Hoàng Mұu, NguyӉn Thӏ Thúy Hѭӡng (2006), Thành ph̯n axit amin và kh̫ năng ch͓u h̩n cͯa m͡t s͙ gi͙ng ÿ̵u t˱˯ng ÿ͓a ph˱˯ng cͯa T͑nh S˯n La. Tҥp chí nông nghiӋp và phát triӇn nông thôn kì II tháng 10. 27. NguyӉn Văn Mùi ( 2001), Th͹c hành hóa sinh h͕c NXB Ĉҥi hӑc quӕc gia, Hà Nӝi. 28. Trӏnh Thӏ Nhҩt, Trҫn Hӗng Uy và Trҫn Ĉình Long (1997), ̪nh h˱ͧng tr͛ng xen ngô-ÿ̵u t˱˯ng ÿ͇n thͥi gian sinh tr˱ͧng và năng sṷt cͯa h͏ th͙ng cây tr͛ng, Nông nghiӋp và Công nghiӋp thӵc phҭm, N0 426, tr. 537- 538. 29. NguyӉn Thӏ Thu Ngà ( 2007), Ĉánh giá kh̫ năng ch͓u h̩n và s͹ÿa d̩ng di truy͉n cͯa các gi͙ng l̩c L12, L14, L15, V79, Luұn văn thҥc sƭ sinh hӑc, Trѭӡng Ĉai hӑc Sѭ phҥm, Ĉҥi hӑc Thái Nguyên. 30. Ĉinh Thӏ Phòng ( 2001), Nghiên cͱu kh̫ năng ch͓u h̩n và ch͕n dòng ch͓u h̩n ͧ lúa b̹ng công ngh͏ t͇ bào th͹c v̵t, Luұn án TiӉn Sƭ Sinh hӑc, ViӋn công nghӋ sinh hӑc, Hà Nӝi. 31. Lê Trӑng Quang, Phҥm Thӏ Trân Châu (1994), M͡t s͙ ch͑ tiêu sinh hóa ͧ m͡t s͙ dòng ÿ̵u t˱˯ng (Glycine max) có tính ch͙ng ch͓u khác nhau, Thông báo khoa hӑc cӫa trѭӡng ÿҥi hӑc, tr. 66- 75. 32. NguyӉn Hҧi Tuҩt, Ngô Kim Khôi (1996), X͵ lý th͙ng kê k͇t qu̫ nghiên cͱu th͹c nghi͏m trong nông lâm ng˱ nghi͏ p trên máy tính, NXB Nông NghiӋp, Hà Nӝi. 62 PHҪN TIӂNG ANH 33. Bates L.S (1973), Rapid determination of free protein for water-stress studies, Plant ADN Soil, 39: 205-207. 34. Gawel N.J Jart R.L (1991), enomic DNA isolation. http:// www.weihenstephan.de/pbpz/bambara/htm/dna.htm. 35. Jinn T., Chang P. L., Chen Y., Key J. L ADN Lin C (1997), Tissue-type specific heat- shock proteins in soybean, Plant Physiol., 114, , pp. 429 – 438. 36. Maitra N ADN Cushman J, C. (1994), “Ioslation ADN characterization drought – induced Soybean cDNA encoding a D95 famyly late – embryogennesis – abudant protein”, Plant physiol., 106, 805 - 806 37. Nanjo T, Koayashi M, Yoshiba Y, Wada K, Tsukaya H, Kakubari Y, Yamaguchi – Shinozaki K (2000) “ Biological funtions of prolinne in morphogenesis and osmotolerance revealed in antiense transgenic Arabidopsis thaliana” – http:www.sovgegenetics.org/ articles/sgu2000-001.htm. 38. Soulage .JL, Kim K, Arrese EL, Walters C, Cushman JC (2003), “Conformation of a group 2 late embryogennesis abudant protein from Soybean. Evidence of poly ( L – proline) – Type II Structure Plant”, Physiol., 131 (3), 963 –75 39. Szoke A, Miao GH, hong Z, verma DPS (1992), “Subcellular location of delta1-pyrroline-5-carboxylate reductase in root/nodule ADN leaf of soybean”, Plant physoil. 99: 1642 – 1649 40. Serrtti C., Schapaugh W. T. ADN Leffel R. C (1994), Amino acid profile of high seed protein soybean, Crop Sci., 34, , pp. 207- 209. 41. Senger F., Nicken S. ADN Coulson A. R (1977), ADN sequencing ˱ith chain W̓mination inhibitors, Proc. Natl. Acad. Sci. 8ĝA, 74, 1977, pp. 5463- 5467 42. Verma DPS, Hu C-AA, Delauney AJ, Miao G-H, Hong Z (1992), Deciphering proline biosynthesis pathway in plants by direct, trans-, ADN co- 63 complementation in bacteria. In “Biosynthesis ADN Molecular Regulation of Amino Acids in Plants (BK Singh, HE Flores, JC Shannon eds), American Society of Plant Physiologists, Warerly Press, Baltimore, MD, pp, 128-138. 43. Wakabayashi Y, Jones ME (1983), “Pyrroline-5-carboxylate synthesis from glutamate by rat intestinal mucosa. J. biol”, Chem.258: 3865-3872. 44. www. worldoil.com 45. www.ncbi.nih.gov/index.html 64 /ӠI CAM ĈOAN Tôi xin camÿoan ÿây là công trình công bӕ cӫa riêng tôi. Các sӕ liӋu, kӃt quҧ nghiên cӭu trong luұn văn là trung thӵc chѭa tӯng có ai công bӕ trong bҩt kì công trình nào. Tác giҧ Ĉinh Th͓ Ng͕c 65 /ӠI CҦM ѪN Tôi xin bày tӓ lòng biӃt ѫn sâu sҳc ÿӃn PGS.TS Chu Hoàng M̵uÿã tұn tình chӍ bҧo và hӃt lòng giúp ÿӥ tôi trong quá trình hoàn thành luұn văn. Tôi xin chân thành cҧm ѫn ThS. Phҥm Thӏ Thanh Nhàn (Giҧng viên khoa sinh - KTNN trѭӡng Ĉҥi hӑc Sѭ phҥm -Ĉҥi Hӑc Thái Nguyên), CN NguyӉn Ích ChiӃn (Phòng thí nghiӋm Di truyӅn hӑc) ÿã tҥo ÿLӅu kiӋn giúp ÿӥ tôi trong quá trình thӵc hiӋn các thí nghiӋm ÿӅ tài luұn văn. Tôi xin chân thành cҧm ѫn Ban lãnh ÿҥo trѭӡng Ĉҥi hӑc Sѭ phҥm -Ĉҥi hӑc Thái Nguyên, Ban chӫ nhiӋm khoa Sinh – KTNN và các thҫy cô giáo, cán bӝ khoa ÿã tҥo ÿLӅu kiӋn giúp ÿӥ tôi trong quá trình hӑc tұp và hoàn thành luұn văn. Tôi xin chân thành cҧm ѫn Ban giám hiӋu trѭӡng THPT Buôn Ma Thuӝt, Sӣ Giáo dөc -Ĉào tҥo Ĉҳk Lҳk, gia ÿình, bҥn bè ÿã tҥo ÿLӅu kiӋn giúp ÿӥ, ÿӝng viên khích lӋ tôi trong suӕt quá trình hӑc tұp và hoàn thành luұn văn. Tác giҧ luұn văn Ĉinh Th͓ Ng͕c 66 0ӨC LӨC MӢĈҪU .................................................................................................................... Chѭѫng 1. TӘNG QUAN TÀI LIӊU........................................................................... 1.1. CÂY ĈҰU TѬѪNG............................................................................................. 1.1.1. Ĉһc ÿLӇm sinh hӑc cӫa cây ÿұu tѭѫng ................................................................ 1.1.2. Gía trӏ kinh tӃ cӫa cây ÿұu tѭѫng ....................................................................... 1.1.3. Tình hình sҧn xuҩt ÿұu tѭѫng trên thӃ giӟi và ӣ ViӋt Nam ................................. 1.1.4. Thành phҫn hóa sinh hҥt ÿұu tѭѫng.................................................................... 1.2. NGHIÊN CӬU VӄĈҺC TÍNH CHӎU HҤN CӪA CÂY ĈҰU TѬѪNG ............. 1.2.1. Khái niӋm vӅ hҥn và tác ÿӝng cӫa hҥn ÿӃn thӵc vұt ........................................... 1.2.2. Cѫ sӣ sinh lý, sinh hóa và sinh hӑc phân tӱ cӫa tính chӏu hҥn ............................ 1.2.2.1. Cѫ sӣ sinh lý, sinh hóa cӫa tính chӏu hҥn ........................................................ 1.2.2.2. Cѫ sӣ phân tӱ cӫa tính chӏu hҥn ...................................................................... 1.2.3. Nghiên cӭu vӅ tính chӏu hҥn ӣ cây ÿұu tѭѫng .................................................... 1.3. NHҰN XÉT CHUNG........................................................................................... Chѭѫng 2. NGUYÊN LIӊU VÀ PHѬѪNG PHÁP NGHIÊN CӬU............................. 2.1. NGUYÊN LIӊU .................................................................................................. 2.1.1. Nguyên liӋu thӵc vұt.......................................................................................... 2.1.2. Hóa chҩt, thiӃt bi va ÿӏa ÿiӇm nghiên cӭө ......................................................... 2.2. PHѬѪNG PHÁP NGHIÊN CӬU......................................................................... 2.2.1. Phѭѫng pháp hoá sinh........................................................................................ 2.2.1.1. Phân tích hóa sinh ӣ giai ÿRҥn hҥt tiӅm sinh ................................................... 2.2.1.2 Ĉánh giá khҧ năng chӏu hҥn thông qua phân tích mӝt sӕ chӍ tiêu hóa sinh ӣ giai ÿoҥn hҥt nҭy mҫm ................................................................................................ 2.2.2. Ĉánh gía khҧ năng chӏu hҥn ӣ giai ÿRҥn cây non bҵng phѭѫng pháp gây hҥn nhân tҥo....................................................................................................................... 2.2.3. Xӱ lý kӃt quҧ và tính toán sӕ liӋu....................................................................... 2.2.4.Phѭѫng pháp sinh hӑc phân tӱ ............................................................................ 67 2.2.4.1. Phѭѫng pháp tách chiӃt ADN tәng sӕ tӯ mҫm ÿұu tѭѫng................................ 2.2.4.2. Phѭѫng pháp xác ÿӏnh hàm lѭӧng và ÿӝ tinh sҥch ADN ................................ 2.2.4.3. Phѭѫng pháp nhân bҧn ÿRҥn ADN thuӝc gen mã hóa cho chaperonin............. 2.2.4.4.Phѭѫng pháp tách dòng ÿoҥn gen chaperonin .................................................. 2.2.4.5. Phѭѫng pháp biӃn nҥp ADN plasmit vào tӃ bào E. coli chӫng DH5a.............. 2.2.4.6. Phѭѫng pháp tách chiӃt ADN plasmit tӯ vi khuҭn........................................... 2.2.4.7. Phѭѫng pháp xác ÿӏnh trình tӵ gen bҵng thiӃt bӏ tӵÿӝng ................................ CHѬѪNG 3. KӂT QUҦ VÀ THҦO LUҰN................................................................ 3.1. ĈÁNH GIÁ CHҨT LѬӦNG HҤT CӪA 5 GIӔNG ĈҰU TѬѪNG NGHIÊN CӬU ........................................................................................................................... 3.1.1.Ĉһc ÿLӇm hình thái, kích thѭӟc và khӕi lѭӧng hҥt 5 giӕng ÿұu tѭѫng nghiên cӭu ............................................................................................................................. 3.1.2. Hàm lѭӧng protein và lipit ӣ hҥt tiӅm sinh ......................................................... 3.1.3. Thành phҫn axit amin trong protein hҥt cӫa các 5 ÿұu tѭѫng.............................. 3.1.4. Nhұn xét vӅÿһc ÿLӇm hình thái, hóa sinh hҥt cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng nghiên cӭu .............................................................................................................................. 3.2. ĈÁNH GIÁ KHҦ NĂNG CHӎU HҤN CӪA 5 GIӔNG ĈҰU TѬѪNG .............. 3.2.1. Khҧ năng chӏu hҥn cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng nghiên cӭu ӣ giai ÿRҥn hҥt nҧy mҫm ............................................................................................................................ 3.2.1.1. Hoҥt ÿӝ proteaza và hàm lѭӧng protein tan trong hҥt nҭy mҫm khi xӱ lý bӣi sorbitol 7% ................................................................................................................. 3.2.1.2. Hoҥt ÿӝ proteaza và hàm lѭӧng protein tan trong hҥt nҭy mҫm khi không xӱ lý bӣi sorbitol 7%................................................................................................... 3.2.1.3. Nhұn xét vӅ khҧ năng chӏu hҥn ӣ gai ÿRҥn hҥt nҭy mҫm ................................. 3.2.2. Khҧ năng chӏu hҥn cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng nghiên cӭu ӣ giai ÿRҥn cây non 3 lá . 3.2.2.1. Tӹ lӋ thiӋt hҥi cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng ӣ giai ÿRҥn cây non 3 lá dѭӟi tác ÿӝng cӫa hҥn ....................................................................................................................... 3.2.2.2. Tӹ lӋ cây sӕng, khҧ năng giӳ nѭӟc và chӍ sӕ chӏu hҥn tѭѫng ÿӕi cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng nghiên cӭu ..................................................................................... 68 3.2.2.3. Ĉánh gía khҧ năng chӏu hҥn thông qua xác ÿӏnh hàm lѭӧng prolin ӣ giai ÿoҥn cây non ............................................................................................................... 3.2.2.4. Nhұn xét vӅ khҧ năng chӏu hҥn ӣ gai ÿRҥn cây non 3 lá................................... 3.2.3. Mӕi quan hӋ giӳa các giӕng ÿұu tѭѫng dӵa trên sӵ biӇu hiӋn cӫa các tính trҥng............................................................................................................................ 3.3. PHÂN LҰP GEN LIÊN QUAN ĈӂN KHҦ NĂNG CHӎU HҤN Ӣ CÂY ĈҰU TѬѪNG ...................................................................................................................... 3.3.1. Tách chiӃt ADN tӯ hӋ gen cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng.............................................. 3.3.2. Nhân gen chaperonin tӃ bào chҩt ӣ 5 giӕng ÿұu tѭѫng bҵng kӻ thuұt PCR ........ 3.3.3.Tách dòng sҧn phҭm PCR và các ÿoҥn cҳt bҵng ezim giӟi hҥn cӫa hai giӕng ÿұu tѭѫng Duy Linh – Lâm Ĉӗng (DL) và NH9 .......................................................... 3.3.3.1. Tách dòng Vҧn phҭm PCR Fӫa hai giӕng ÿұu tѭѫng DL và NH9 ..................... 3.3.3.2. KiӇm tra vectѫ tái tә hӧp mang ÿRҥn gen chaperonin bҵng enzym giӟi Kҥn ... 3.3.4. KӃt quҧ giҧi trình tӵ nucleotit cӫa gen chaperonin cӫa hai giӕng ÿұu tѭѫng DL và NH9.................................................................................................................. KӂT LUҰN VÀ Ĉӄ NGHI ......................................................................................... CÔNG TRÌNH CÔNG BӔ CÓ LIÊN QUAN ............................................................ TÀI LIӊU THAM KHҦO ........................................................................................... 69 DANH MӨC CÁC CHӲ VIӂT TҲT ABA Axit abscisic (Abscisis acid) ADN Axit deoxyribonucleic ARN Axit ribonucleic ASTT Áp suҩt thҭm thҩu ATP- aza Enzym phân giҧi ATP Bp Cһp bazѫ cADN Sӧi ADN bә sung ÿѭӧc tәng hӧp tӯ mARN nhӡ enzyme phiên ngѭӧc CCT Chaperonin chӭa polypeptit –1 cӫa phӭc t ( chaperonin tӃ bào chҩt) dNTP Deoxynucleotid DHA Docosa Hexaenoic Axit EDTA Ethylendiamin tetraacetic axit EPA Eicosa Pentaenoic axit HSP Heat shock protein - Protein sӕc nhiӋt HSG Heat Shock Granules HSPL HӋ sӕ pha loãng Kb Kilo bazѫ = 1000 bp LEA Late embryogenesis abundant MGPT Môi giӟi phân tӱ - Molecular chaperone MW Molecular weight - Khӕi lѭӧng phân tӱ P5CS Delta pyrroline - 5 - Carborxylate Synthetase PCR Polymeraza chain reaction - Phҧn ӭng chuӛi polimeraza 70 DANH MӨC CÁC BҦNG %ҧng Tên Eҧng Trang 1.1 Sҧn lѭӧng ÿұu tѭѫng cӫa mӝt sӕ nѭӟc trên thӃ giӟi niên vө 2006-2007 5 1.2 DiӋn tích, năng suҩt, sҧn lѭӧng ÿұu tѭѫng cҧ nѭӟc 5 1.3 DiӋn tích, năng suҩt, sҧn lѭӧng ÿұu tѭѫng cҧ nѭӟc 6 2.1 Nguӗn gӕc cӫa các giӕng ÿұu tѭѫng 17 2.2 Thành phҫn phҧn ӭng cӫa PCR 24 3.1 Màu sҳc, hình dҥng, kích thѭӟc và khӕi lѭӧng hҥt cӫa các giӕng ÿұu tѭѫng nghiên cӭu 27 3.2 Hàm lѭӧng protein và lipit cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng 29 3.3 Hàm lѭӧng axit amin trong hҥt cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng 31 3.4 Hoҥt ÿӝ Fӫa proteaza và hàm lѭӧng protein tan ӣ giai ÿRҥn hҥt nҧy mҫm khi xӱ lý bӣi sorbitol 36 3.5 Hoҥt ÿӝ Fӫa proteaza và hàm lѭӧng protein tan ӣ giai ÿRҥn hҥt nҧy mҫm khi không xӱ lý bӣi sorbitol 37 3.6 Tӹ lӋ thiӋt hҥi ӣ giai ÿRҥn cây non 3 lá cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng nghiên cӭu 38 3.7 Tӹ lӋ cây sӕng, khҧ năng giӳ nѭӟc và chӍ sӕ chӏu hҥn Wѭѫng ÿӕi cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng 40 3.8 Hàm lѭӧng prolin ӣ thӡi ÿLӇm trѭӟc và sau khi bӏ hҥn 41 3.9 HӋ sӕ khác nhau giӳa 5 giӕng ÿұu tѭѫng 43 3.10 Thӕng kê các Yӏ trí nucleotit thay ÿәi trong gen chaperonin DL- Chap1, DL- Chap2 và NH9 so vӟi Bonminori – Nhұt %ҧn 53 3.11 Trình tӵ axit amin Fӫa gen chaperonin thay ÿәi ӣ các giӕng ÿұu tѭѫng 54 71 DANH MӨC CÁC HÌNH Hình Tên Hình Trang 3.1 Hình thái hҥt cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng nghiên cӭu 28 3.2 Sҳc ký ÿӗ axit amin cӫa bӝt giӕng ÿұu tѭѫng DL 30 3.3 Sҳc ký ÿӗ axit amin cӫa bӝt giӕng ÿұu tѭѫng ST 30 3.4 Sҳc ký ÿӗ axit amin cӫa bӝt giӕng ÿұu tѭѫng CNg 32 3.5 Sҳc ký ÿӗ axit amin cӫa bӝt giӕng ÿұu tѭѫng NH9 32 3.6 Sҳc ký ÿӗ axit amin cӫa bӝt giӕng ÿұu tѭѫng AZP 33 3.7 Tӹ lӋ thiӋt hҥi cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng nghiên cӭu 5, 7, 9 ngày hҥn 39 3.8 Hàm lѭѫng prolin cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng nghiên cӭu 42 3.9 6ѫÿӗ mô tҧ mӕi quan hӋ cӫa 5 giӕng ÿұu tѭѫng 44 3.10 Ҧnh ÿLӋn di ADN tәng sӕ tӯ 5 giӕng ÿұu tѭѫn 45 3.11 Hình ҧnh ÿLӋn di ÿRҥn gen chaperonin ÿѭӧc nhân lên bҵng kӻ thuұt PCR ӣ 5 giӕng ÿұu tѭѫng 46 3.12 ĈiӋn di Vҧn phҭm cҳt các plasmit tái tә hӧp bҵng enzim giӟi Kҥn 47 3.13 Trình tӵ gien chaperonin tӃ bào chҩt Fӫa giӕng ÿұu tѭѫng DL, giӕng NH9, giӕng ÿұu tѭѫng chӏu Kҥn Cúc Vàng, giӕng ÿӝt biӃn M103 và giӕng ÿұu tѭѫng chӏu Oҥnh Nhұt %ҧn – Bonminori 48