Luận văn Nghiên cứu thu nhận enzym α-Amylase từ trực khuẩn cỏ khô
MỞ ĐẦU Vi sinh vật trong tự nhiên rất đa dạng và phong phú. Chúng có mặt khắp nơi: trong đất, trong nước, trong không khí, kể cả trong cơ thể con người. Ngoài tác hại do vi sinh vật gây ra như: gây bệnh cho thực vật, động vật và con người; thì nguồn lợi mà chúng mang lại cho chúng ta vô cùng to lớn nếu ta hiểu, biết và sử dụng chúng hợp lý. Các chủng vi sinh vật nói chung và vi khuẩn Bacillus nói riêng đã và đang được sử dụng rất phổ biến trong các chế phẩm sinh học để phục vụ cho các ngành sản xuất như: rượu, bia, công nghiệp dệt, thuộc da, bổ sung vào thức ăn cho gia súc để dễ tiêu hoá, thức ăn trong nuôi trồng thuỷ sản, trong y học và nghiên cứu, là nhờ khả năng sinh các loại enzym thuỷ phân của các chủng vi sinh vật này. Enzym là những chất xúc tác sinh học, ngoài những tính chất của một chất xúc tác nó còn có những tính chất ưu việt hơn như: có hiệu suất xúc tác rất cao ở điều kiện nhiệt độ và áp suất bình thường, có tính đặc hiệu cao. Các tính chất này vẫn được bảo tồn khi tách enzym ra khỏi hệ thống sống, hoạt động trong điều kiện invitro. Vì vậy, enzym ngày càng được sử dụng rộng rãi trong thực tế, với quy mô ngày càng lớn, dẫn đến việc hình thành và phát triển ngành công nghệ sản xuất enzym. Việc sử dụng enzym trong thực tế không chỉ có ý nghĩa về kinh tế mà còn giải quyết nhiều vấn đề xã hội, các vấn đề bức xúc về môi trường. Trước kia, enzym thường được thu nhận từ tế bào thực vật hoặc động vật (chẳng hạn amylase được lấy từ hạt nảy mầm, protease từ nhựa đu đủ, dạ dày, ). Tuy nhiên quá trình sinh tổng hợp enzym ở động vật và thực vật gắn liền với sự trao đổi chất và nhu cầu của tế bào. Ngoài ra, người ta còn phải phá bỏ các tổ chức tế bào để tách chiết và thu nhận enzym. Như vậy, việc dùng tế bào động vật, thực vật làm nguồn nguyên liệu để thu nhận enzym là khá hạn chế, thiếu tính kinh tế và không đáp ứng được nhu cầu về số lượng enzym cần thiết cho sản xuất. Trong khi đó, ở vi sinh vật hầu như chứa đầy đủ các loại enzym và việc sử dụng nguồn enzym từ vi sinh vật mang lại lợi ích lớn hơn, cụ thể như nguồn nguyên liệu dùng để nuôi cấy vi sinh vật thường rẻ tiền hơn vì chúng thường là phế phụ phẩm công nông nghiệp (như cám, trấu, bã mía, bã khoai mỳ, ) hoặc nguồn nguyên liệu tự nhiên như dầu mỏ, khí đốt, Mặt khác, điều kiện nuôi cấy dễ dàng, và enzym có hoạt tính cao hơn. Vì thế, khoảng 50 năm gần đây các chế phẩm enzym từ vi sinh vật đã dần thay thế các enzym có nguồn gốc thực vật, động vật. Trong hàng loạt các loại enzym khác nhau thì amylase là enzym phân giải tinh bột tạo đường cho các sinh vật. Từ những năm đầu thế kỷ 18 các nhà khoa học đã bắt đầu nghiên cứu về amylase và đến nay đã biết khá rõ về loại enzym này. Amylase được ứng dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực sản xuất như công nghiệp thực phẩm, công nghiệp dệt, Sản xuất amylase công nghiệp đã được chú ý từ rất lâu và ngày càng phát triển ở nhiều nước trên thế giới. Việt Nam chúng ta là một trong nhiều nước đã và đang có rất nhiều nghiên cứu và ứng dụng enzym amylase, nhưng nền công nghiệp sản xuất enzym ở nước ta chưa thật sự phát triển. Xuất phát từ cơ sở trên chúng tôi chọn đề tài cho luận văn: “Nghiên cứu thu nhận enzym a-amylase từ trực khuẩn cỏ khô”. Nội dung của đề tài gồm một số vấn đề sau: 1. Phân lập và tuyển chọn các chủng vi khuẩn có khả năng sinh trưởng và sinh enzim amylase có hoạt tính mạnh từ đất vườn qua trung gian cỏ khô. 2. Nghiên cứu hình thái tế bào, hình thái khuẩn lạc, và các đặc điểm sinh học của chủng tuyển chọn. 3. Khảo sát các điều kiện nuôi cấy tối ưu để thu được dịch enzym amylase có hoạt độ cao. 4. Định danh chủng được tuyển chọn bằng kỹ thuật di truyền phân tử. 5. Nuôi cấy chủng đã tuyển chọn trong thiết bị bình lên men tam giác 1 lít với các điều kiện nuôi cấy tối ưu. Nghiên cứu động học quá trình sinh tổng hợp amylase với 3 thông số là pH, sinh trưởng và hoạt độ enzym. 6. Tách chiết enzym amylase từ dịch lên men nhờ các tác nhân tủa. 7. So sánh hiệu suất thu nhận và hoạt độ chế phẩm enzym (CPE) amylase thu được từ các tác nhân tủa khác nhau. 8. Nghiên cứu độ bền nhiệt và độ bền pH của CPE amylase.
Bạn đang xem trước 20 trang tài liệu Luận văn Nghiên cứu thu nhận enzym α-Amylase từ trực khuẩn cỏ khô, để xem tài liệu hoàn chỉnh bạn click vào nút DOWNLOAD ở trên
ôùi noàng ñoä NaCl laø 7% coù OD620 = 0,035 maø
OD620 cuûa moâi tröôøng = 0,037. Ñieàu ñoù coù nghóa noàng ñoä NaCl cao nhaát öùc cheá
sinh tröôûng laø 7%. Vaäy khaû naêng chòu maën cuûa chuûng CK2 naøy töông ñoái cao.
3.5. Xaùc ñònh teân cuûa chuûng CK2 ñaõ tuyeån choïn
Töø nhöõng ñaëc ñieåm sinh hoïc cuûa chuûng CK2 nhö ñaõ trình baøy ôû baûng 3.4,
chuùng toâi ñi ñeán keát luaän: chuûng CK2 laø moät loaøi thuoäc chi Bacillus. Vaø ñeå xaùc
ñònh chính xaùc laø loaøi naøo chuùng toâi döïa vaøo keát quaû phaân tích trình töï 16S-
rARN, vaø trình töï naøy do phoøng xeùt nghieäm NK-BIOTEK cuûa Coâng ty Nam
Khoa xaùc ñònh. Keát quaû ñöôïc trình baøy ôû hình 3.5
CATGCAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGC
GGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAAC
TCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTC
AAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCG
CATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAG
CCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAG
ACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGT
CTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAG
CTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTG
ACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCA
Hình 3.5. Trình töï 16S-rARN cuûa chuûng CK2
Trình töï 16S-rARN cuûa chuûng CK2 ñöôïc so saùnh vôùi trình töï 16S-rARN
cuûa loaøi chuaån ñaõ ñöôïc ñònh loaïi trong ngaân haøng gen BLAST. Keát quaû cho thaáy
möùc ñoä gioáng nhau cuûa chuûng CK2 vôùi loaøi Bacillus subtilis laø 100%. Keát quaû
naøy cho pheùp keát luaän chuûng CK2 ñaõ phaân laäp ñöôïc laø Bacillus subtilis vaø chuùng
toâi goïi chuûng naøy laø Bacillus subtilis CK2.
3.6. Nghieân cöùu ñoäng hoïc cuûa quaù trình leân men trong bình tam giaùc 1 lít.
Qua caùc keát quaû nghieân cöùu ôû muïc 3.4, chuùng toâi ñaõ coù keát luaän veà caùc
ñieàu kieän nuoâi caáy toái öu ñeå chuûng Bacillus subtilis CK2 ñaõ phaân laäp ñöôïc sinh
amylase coù hoaït ñoä cao nhaát nhö sau: moâi tröôøng söû duïng chaát caûm öùng laø tinh
boät tan vôùi noàng ñoä 1,5%; pH ban ñaàu = 7,5; nhieät ñoä nuoâi caáy töø 35-370C; ñoä
hieáu khí vôùi tæ leä 100ml dòch nuoâi caáy/500ml theå tích bình; noàng ñoä toái öu cuûa
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
20 30 35 40 45 50 55 60 70
Thời gian (h)
O
D
62
0
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
H
oạ
t đ
ộ a
m
yl
as
e
(U
I/m
l)
Sinh trưởng Hoạt độ
caùc loaïi muoái: NaCl 0,08%; CaCl2 0,01%.
Chuùng toâi tieán haønh nghieân cöùu ñoäng hoïc quaù trình leân men chuûng
Bacillus subtilis CK2 theo phöông phaùp ñaõ trình baøy ôû muïc 2.3.9. Keát quaû ñöôïc
trình baøy ôû baûng 3.13 vaø ñoà thò 3.3.
Baûng 3.13. Nghieân cöùu ñoäng hoïc quaù trình leân men Bacillus subtilis CK2
Thôøi gian (h) pH OD620 Hoạt ñộ amylase (UI/ml)
20 6,86 0,943 19,516 ± 0,045
30 7,21 1,176 21,367 ± 0,061
35 7,27 1,353 25,523 ± 0,061
40 7,32 1,688 32,354 ± 0,077
45 7,58 1,676 44,585 ± 0,084
50 7,55 1,630 44,147 ± 0,102
55 7,54 1,597 43,020 ± 0,089
60 7,48 1,524 40,513 ± 0,160
70 7,40 1,458 38,091 ± 0,094
Ñoà thò 3.3. Ñoäng hoïc quaù trình nuoâi caáy B. subtilis CK2 sinh α-amylase
Chuùng toâi nhaän thaáy keát quûa ở baûng 3.13 phuø hôïp vôùi nhöõng keát quaû ñaõ
thu ñöôïc ôû treân. Cuï theå laø Bacillus subtilis CK2 sinh tröôûng cao nhaát vaøo thôøi
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6
1.8
2.0
Etanol Aceton Sunfate amon
Taùc nhaân tuûaH
ie
äu
su
aát
th
u
nh
aän
C
P
E
am
yl
as
e
(g
/1
00
m
l)
gian 40 giôø sau khi nuoâi caáy, vaø hoaït ñoä amylase cao nhaát luùc 45 giôø. Khi leân
men vôùi caùc ñieàu kieän nuoâi caáy toái öu thì hoaït ñoä amylase cao hôn haún so vôùi khi
khaûo saùt töøng ñieàu kieän nuoâi caáy.
3.7. Taùch enzym töø dòch nuoâi caáy, xaùc ñònh hoaït ñoä vaø ñoä beàn cuûa enzym
3.7.1. Taùch enzym töø dòch nuoâi caáy vôùi caùc taùc nhaân tuûa khaùc nhau
Sau khi nghieân cöùu ñoäng hoïc thu ñöôïc amylase coù hoaït ñoä cao, chuùng toâi
tieán haønh taùch amylase nhôø caùc taùc nhaân tuûa nhö: etanol 960C, aceton, sulphate
amon theo phöông phaùp ñaõ trình baøy ôû muïc 2.3.11. Keát quaû ñöôïc trình baøy ôû
baûng 3.14 vaø bieåu ñoà 3.9.
Baûng 3.14. Hieäu suaát thu nhaän CPE amylase töø caùc taùc nhaân tuûa
Taùc nhaân tuûa
Hieäu suaát thu nhaän
enzym (g/100ml)
Etanol 960C 1,23
Aceton 1,85
Sulphate amon 0,87
Bieåu ñoà 3.9. Hieäu suaát thu nhaän CPE amylase bôûi caùc taùc nhaân tuûa khaùc nhau
Keát quaû thu ñöôïc cho thaáy hieäu suaát thu nhaän CPE amylase ñaït giaù trò cao
khi duøng taùc nhaân tuûa laø aceton. Do aceton laø dung moâi khoâng phaân cöïc, coù haèng
0
2000
4000
6000
8000
10000
12000
Etanol Aceton Sulphate amon
Taùc nhaân tuûa
H
oa
ït
ño
ä C
PE
a
m
yl
as
e
(U
I/
g)
soá ñieän moâi nhoû neân ngaên caûn söï phaân taùn cuûa caùc protein trong dung dòch. Vì
theá trong moâi tröôøng coù moät löôïng lôùn aceton ñaõ laøm keát tuûa caùc enzym, protein
vaø caùc taïp chaát phaân töû lôùn khaùc.
3.7.2. Hoaït ñoä cuûa CPE amylase thu ñöôïc bôûi caùc taùc nhaân tuûa
Caân 0,1g CPE amylase töø caùc taùc nhaân tuûa khaùc nhau pha vôùi 50ml nöôùc
caát, roài tieáp tuïc pha loaõng vôùi noàng ñoä thích hôïp. Tieán haønh thí nghieäm xaùc ñònh
hoaït ñoä amylase theo phöông phaùp Heinkel. Keát quaû ñöôïc trình baøy ôû baûng 3.15
vaø bieåu ñoà 3.10.
Baûng 3.15. Hoaït ñoä CPE amylase thu ñöôïc töø caùc taùc nhaân tuûa
Taùc nhaân tuûa Hoaït ñoä amylase (UI/g CPE)
Etanol 960 10902,28 ± 21,86
Aceton 8525,82 ± 15,17
Sulphate amon 3974,79 ± 19,27
Bieåu ñoà 3.10. Hoaït ñoä cuûa CPE amylase thu ñöôïc töø caùc taùc nhaân tuûa
Keát quaû theå hieän ôû baûng 3.15 cho thaáy khi duøng taùc nhaân tuûa laø etanol 960
thì hoaït ñoä cuûa CPE amylase thu ñöôïc cao hôn so vôùi khi duøng taùc nhaân tuûa laø
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
4 30 40 50 60 70 80 90 100 Nhiệt độ (
0C)
H
oa
ït
ño
ä C
PE
a
m
yl
as
e
co
øn
la
ïi (
%
)
aceton, sulphate amon. Vaäy chuùng toâi seõ duøng CPE amylase ñöôïc tuûa bôûi etanol
960C ñeå laøm caùc thí nghieäm tieáp theo.
3.7.3. Xaùc ñònh ñoä beàn nhieät cuûa CPE amylase
Chuùng toâi tieán haønh thí nghieäm nhö phöông phaùp ôû muïc 2.3.13.1. Keát quaû
ñöôïc trình baøy ôû baûng 3.16 vaø bieåu ñoà 3.11.
Baûng 3.16. Ñoä beàn nhieät cuûa CPE amylase
Nhiệt ñộ
(oC)
Hoaït ñoä CPE amylase
(UI/g CPE)
Hoaït ñoä coøn laïi
(%)
4 11032,67 ± 41,43 100
30 11024,25 ± 15,17 99,92
40 10691,97 ± 15,17 96,91
50 10225,09 ± 11,13 92,68
60 9699,32 ± 18,33 87,91
70 8790,80 ± 8,41 79,68
80 3974,79 ± 19,27 36,03
90 88,33 ± 12,62 0,80
100 0,00 0,00
Bieåu ñoà 3.11. Ñoä beàn nhieät cuûa CPE amylase
Keát quaû thu ñöôïc cho thaáy nhieät ñoä caøng cao thì hoaït ñoä cuûa amylase
caøng giaûm; ñaëc bieät laø töø 80-1000C: hoaït ñoä giaûm maïnh ôû 800C vaø gaàn nhö maát
khaû naêng hoaït ñoäng ôû 900C trôû leân. ÔÛ nhieät ñoä töø 30-700C CPE amylase hoaït
ñoäng töông ñoái toát. Vaäy CPE amylase cuûa chuûng Bacillus subtilis CK2 töông ñoái
beàn nhieät.
Nhöõng amylase beàn nhieät coù yù nghóa raát lôùn trong thöïc teá saûn xuaát vaø baûo
quaûn saûn phaåm sau naøy. Vì nhieät ñoä khoâng nhöõng aûnh höôûng ñeán thôøi gian baûn
quaûn saûn phaåm maø coøn aûnh höôûng ñeán caùch thöùc taïo cheá phaåm. Neáu chuùng ta
neùn saûn phaåm thaønh vieân ta coù theå baûo quaûn chuùng deã daøng hôn laø daïng boät
hoaëc daïng dòch loûng. Nhöng neáu ôû daïng vieân neùn thì phaûi xöû lyù ôû 1000C trong
voøng 30 phuùt, maø caùc amylase thu ñöôïc ôû treân seõ maát hoaït tính ôû 1000C neân
chuùng chæ thích hôïp baûo quaûn ôû daïng boät hoaëc daïng loûng.
Ngoaøi ra, caùc enzym beàn nhieät coøn coù nhieàu lôïi theá trong quaù trình xöû lyù
thöùc aên tröôùc khi cho vaät nuoâi aên. Thöùc aên ñöôïc uû ôû nhieät ñoä cao trong voøng vaøi
giôø maø vaãn khoâng laøm giaûm hoaït ñoä nhieàu maø coøn taêng toác ñoä phaûn öùng. Hôn nöõa
vieäc troän enzym vaøo thöùc aên ôû nhieät ñoä cao tröôùc khi cho vaät nuoâi aên coøn coù taùc
duïng laøm giaûm söï taïp nhieãm VSV coù haïi thöôøng phaùt trieån ôû nhieät ñoä 30-400C.
3.7.4. Xaùc ñònh ñoä beàn pH cuûa CPE amylase
pH laø yeáu toá aûnh höôûng nhieàu leân hoaït ñoäng cuûa enzym noùi chung vaø cuûa
amylase noùi rieâng. Vì theá chuùng toâi ñaõ tieán haønh xaùc ñònh aûnh höôûng cuûa pH leân
ñoä beàn cuûa CPE amylase theo phöông phaùp ñaõ trình baøy ôû muïc 2.3.13.2. Keát quaû
thu ñöôïc trình baøy ôû baûng 3.17 vaø bieåu ñoà 3.12
0
20
40
60
80
100
4,0 4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 pH
H
oa
ït
ño
ä C
PE
a
m
yl
as
e
co
øn
la
ïi (
%
)
Baûng 3.17 . Ñoä beàn pH cuûa CPE amylase
pH
Hoaït ñoä CPE amylase
(UI/ g CPE)
Hoaït ñoä amylase
coøn laïi (%)
4,0 715,04 ± 8,41 6,27
4,5 4206,13 ± 11,13 36,89
5,0 8361,78 ± 8,41 73,33
5,5 10183,03 ± 14,57 89,30
6,0 11402,81 ± 8,41 100
6,5 10670,94 ± 15,17 93,58
7,0 9291,33 ± 11,13 81,48
7,5 8408,04 ± 15,17 73,74
8,0 5850,72 ± 18,33 51,31
Bieåu ñoà 3.12. Ñoä beàn pH cuûa CPE amylase
CPE amylase töông ñoái beàn ôû pH töø 5,0 ñeán 7,5; ngoaøi möùc pH naøy thì
CPE amylase hoaït ñoäng yeáu vaø chuùng hoaït ñoäng toát ôû pH = 6.
Chương IV: KEÁT LUAÄN VAØ KIEÁN NGHÒ
KEÁT LUAÄN
Töø nhöõng keát quaû ôû treân, chuùng toâi ñöa ra moät soá keát luaän nhö sau:
1. Töø maãu ñaát vöôøn qua trung gian coû khoâ chuùng toâi ñaõ phaân laäp ñöôïc 17
chuûng thuaàn (kyù hieäu laø CK). Trong ñoù tuyeån choïn ñöôïc 3 chuûng laø CK1,
CK2, CK3 coù khaû naêng sinh enzym amylase coù hoaït tính cao (vôùi D-d laàn
löôït laø: 20, 22 vaø 25mm). Tieáp tuïc nghieân cöùu khaû naêng sinh tröôûng (ño
OD620) vaø xaùc ñònh hoaït ñoä amylase theo phöông phaùp Heinkel, chuùng toâi
choïn ñöôïc chuûng CK2 vöøa coù khaû naêng sinh tröôûng vaø sinh amylase maïnh
nhaát.
2. Töø nhöõng ñaëc ñieåm sinh hoïc cuûa chuûng CK2 maø chuùng toâi ñaõ trình baøy ôû
baûng 3.4, chuùng toâi ñi ñeán keát luaän: chuûng CK2 laø moät loaøi thuoäc chi
Bacillus. Ñoàng thôøi chuûng naøy cuõng ñöôïc ñònh danh ñeán loaøi baèng kyõ
thuaät di truyeàn phaân töû ñaõ cho keát luaän chuûng naøy laø Bacillus subtilis
(chuùng toâi ñaët teân laø Bacillus subtilis CK2).
3. Caùc ñieàu kieän toái öu cho hoaït ñoäng sinh tröôûng vaø sinh amylase coù hoaït
ñoä cao cuûa chuûng Bacillus subtilis CK2 laø:
Cô chaát: chuûng naøy sinh tröôûng vaø sinh amylase maïnh nhaát khi nuoâi
caáy trong moâi tröôøng coù cô chaát laø tinh boät tan. Ñaëc bieät vôùi noàng ñoä tinh
boät tan laø 1,5% thì chuûng naøy sinh tröôûng maïnh nhaát (OD620 = 1,612) vaø
cho amylase coù hoaït ñoä cao nhaát (16,370 UI/ml) .
Nhieät ñoä toái öu ñeå nuoâi caáy laø: 35 - 370C.
pH ban ñaàu thích hôïp cuûa moâi tröôøng nuoâi caáy laø pH = 7,0 - 7,5.
Ñoä hieáu khí: tæ leä theå tích dòch nuoâi caáy/theå tích bình nuoâi laø:
100ml/500ml.
Noàng ñoä caùc loaïi: muoái NaCl thích hôïp laø 0,08%; CaCl2: 0,01%.
4. Khi nuoâi caáy vôùi taát caû caùc ñieàu kieän toái öu thì chuûng naøy cho amylase coù
hoaït ñoä cao hôn so vôùi khi nghieân cöùu töøng ñieàu kieän nuoâi caáy. Chuùng toâi
tieán haønh taùch amylase nhôø caùc taùc nhaân tuûa khaùc nhau, keát quaû cho thaáy
aceton cho amylase vôùi haøm löôïng cao, coøn etanol 960 laïi cho amylase coù
hoaït ñoä cao. Neân chuùng toâi quyeát ñònh söû duïng etanol 960 laøm taùc nhaân
tuûa ñeå taùch amylase.
5. CPE amylase thu ñöôïc töø taùc nhaân tuûa laø Etanol 960 töông ñoái beàn nhieät,
hoaït ñoäng toát vôùi nhieät ñoä 30–700C, ñoàng thôøi chòu ñöôïc pH vôùi ngöôõng
roäng töø 5,0 - 8,0.
KIEÁN NGHÒ
Treân ñaây laø nhöõng keát quaû nghieân cöùu böôùc ñaàu, ñeå taêng hieäu quaû öùng
duïng cuûa ñeà taøi naøy, chuùng toâi ñeà nghò tieáp tuïc nghieân cöùu theâm caùc höôùng sau:
1. Nghieân cöùu qui trình saûn xuaát amylase ôû quy moâ lôùn hôn vôùi caùc thieát bò
leân men chìm ñeå thu nhaän amylase coù haøm löôïng vaø hoaït ñoä cao.
2. Nghieân cöùu toái öu hoaù caùc yeáu toá aûnh höôûng nhaèm naâng cao hoaït ñoä vaø
ñoä beàn cuûa amylase.
3. Tinh saïch CPE amylase coù hoaït ñoä cao ñeå öùng duïng coù hieäu quaû vaøo
saûn xuaát.
TAØI LIEÄU THAM KHAÛO
Tieáng Vieät
1. Nguyeãn Höõu Chaán (1996), Enzym vaø xuùc taùc sinh hoïc, NXB Y hoïc.
2. GS.TSKH. Phaïm Thò Traân Chaâu, PGS.TS. Phan Tuaán Nghóa, Coâng
ngheä sinh hoïc taäp ba – Enzym vaø öùng duïng, NXB Giaùo duïc.
3. Nguyeãn Laân Duõng, Nguyeãn Ñình Quyeán, Phaïm Vaên Ty (2003), Vi sinh
vaät hoïc, NXB Giaùo Duïc.
4. Leâ Thò Hoaøng Haïnh (2006), Nghieân cöùu caùc ñaëc tính vaø öùng duïng cuûa
amylase töø vi sinh vaät daïng hoaø tan, daïng coá ñònh, Luaän vaên Thaïc só
Sinh hoïc, Tröôøng Ñaïi hoïc Sö phaïm Tp. Hoà Chí Minh.
5. Cao Thò Haïnh (2007), Nghieân cöùu nuoâi vi khuaån Bacillus thu sinh khoái
ñeå saûn xuaát cheá phaåm EMINA duøng trong chaên nuoâi vaø baûo veä moâi
tröôøng, Khoaù luaän toát nghieäp, Tröôøng Ñaïi hoïc Noâng nghieäp I – Haø
Noäi.
6. Tröông Phöôùc Thieân Hoaøng (2007), Khaûo saùt hoaït tính moät soá heäenzym
thuyû phaân amylase, cellulase, pectinase thu töø ba chuûng
Trichoderma phaân laäp töø mieàn Ñoâng Nam Boä, Luaän vaên Thaïc só
Sinh hoïc, Tröôøng Ñaïi hoïc Khoa Hoïc Töï Nhieân Tp. Hoà Chí Minh.
7. PGS.TS. Phaïm Thò Aùnh Hoàng, Taøi lieäu thöïc taäp kyõ thuaät sinh hoaù,
Tröôøng Ñaïi hoïc Khoa hoïc Töï nhieân Tp. Hoà Chí Minh.
8. Nguyeãn Ñöùc Löôïng (chuû bieân), Cao Cöôøng, Nguyeãn Aùnh Tuyeát, Leâ
Thò Thuyû Tieân, Huyønh Ngoïc Oanh, Nguyeãn Thuyù Höông, Phan Thò
Huyeàn, Taï Thu Haèng (2004), Coâng ngheä enzym, NXB Ñaïi hoïc
Quoác gia Tp. Hoà Chí Minh,.
9. Nguyeãn Ñöùc Löôïng, Coâng ngheä vi sinh taäp 2 – Vi sinh vaät hoïc coâng
nghieäp, NXB Ñaïi hoïc Quoác gia Tp. Hoà Chí Minh.
10. Nguyeãn Ñöùc Löôïng (2002), Vi sinh vaät coâng nghieäp, NXB Ñaïi hoïc
Quoác gia Tp. Hoà Chí Minh.
11. Nguyeãn Ñöùc Löôïng, Phan Thò Huyeàn, Nguyeãn Aùnh Tuyeát (2003), Thí
nghieäm vi sinh vaät hoïc, NXB Ñaïi hoïc Quoác gia Tp. Hoà Chí Minh.
12. Traàn Ñình Maán, Löông Ñöùc Phaåm, Leâ Vaên Nhöông (2001), Taùch saïch
α-amylase chòu nhieät töø chuûng vi khuaån 3BT2 vaø S168M
[PHV33BLAMY.BSPR], Hoäi thaûo quoác teá Sinh hoïc.
13. Löông Ñöùc Phaåm (2004), Coâng ngheä vi sinh vaät, NXB Noâng nghieäp.
14. Nguyeãn Quyeát (2004), Nghieân cöùu caùc ñaëc tính vaø öùng duïng cuûa
α-amylase daïng hoaø tan vaø daïng coá ñònh thu nhaän töø vi khuaån
Bacillus subtilis, Luaän vaên Thaïc só khoa hoïc, Tröôøng Ñaïi hoïc Khoa
hoïc Töï nhieân Tp. Hoà Chí Minh.
15. Ñoàng Thò Thanh Thu (2004), Giaùo trình sinh hoaù cô baûn, Tuû saùch
Tröôøng Ñaïi hoïc Töï nhieân, Tp. Hoà Chí Minh.
16. Ñaëng Thò Thu, Leâ Ngoïc Tuù, Toâ Kim Anh, Phaïm Thu Thuyû, Nguyeãn
Xuaân Saâm (2004), Coâng ngheä enzym, NXB Khoa hoïc vaø Kyõ thuaät.
17. Nguyeãn Thò Huyeàn Thu (2007), Nghieân cöùu, phaân laäp vaø tuyeån choïn
caùc chuûng Bacillus sinh enzym thuyû phaân töø ñaát vöôøn, Khoaù luaän toát
nghieäp, Vieän Ñaïi hoïc Môû Haø Noäi.
18. Traàn Linh Thöôùc, Nguyeãn Ñöùc Hoaøng, Phan Thò Phöôïng Trang, Phaïm
Thò Hoàng Töôi, Thöïc taäp vi sinh vaät hoïc, NXB Ñaïi hoïc Quoác gia
Tp. Hoà Chí Minh.
19. Traàn Linh Thöôùc, Phöông phaùp phaân tích vi sinh vaät trong nöôùc, thöïc
phaåm vaø myõ phaåm, NXB Giaùo duïc.
20. Ñoaøn Vaên Thöôïc (2005), Tuyeån choïn vaø nghieân cöùu moät soá chuûng vi
sinh vaät coù khaû naêng sinh amylase treân baõ saén pheá thaûi ñeå saûn xuaát
enzym cho chaên nuoâi gia suùc, Luaän vaên Thaïc só Khoa hoïc Sinh hoïc,
Tröôøng Ñaïi hoïc Sö Phaïm Haø Noäi.
21. Laïi Thanh Tuøng (2003), Nghieân cöùu tuyeån choïn vi sinh vaät öa maën, öa
kieàm coù hoaït tính sinh hoïc phaân laäp töø nöôùc bieån ven bôø bieån Baéc
boä, Luaän vaên Thaïc só Sinh hoïc, Tröôøng Ñaïi hoïc Khoa hoïc Töï nhieân
Haø Noäi.
22. Ñaøo Thò Thanh Xuaân (2008), Nghieân cöùu söû duïng nhoùm vi khuaån
Bacillus taïo cheá phaåm sinh hoïc xöû lyù moâi tröôøng nöôùc nuoâi thuyû saûn,
Luaän vaên Thaïc só Sinh hoïc, Tröôøng Ñaïi hoïc Sö Phaïm Haø Noäi.
Tieáng nöôùc ngoaøi
23. Arie Altman (1998), Agricutural biotechnology, Marcel Dekker, Inc,
New York. Basel. HongKong, pp.263-275.
24. Dertz, E. A.; Xu, J.; Stintzi, A.; Raymond, K. N. (2006), Bacillibactin-
Mediated Iron Transport in Bacillus subtilis, J. Am. Chem. Soc.
25. George A. Wistreich (1984), Microbiology laboratory, Macmillan
publishing.
26. Gerhartz. W. (1992). Enzyme in Industry. Production and Applications.
V. H. C. Weiheim. New York.
27. Gupta, R.; Gigras, P.; Mohapatra, H. (2003), Microbial amylase: a
biotechnological perspectiye, Process Biochemistry.
28. Harold E. Swaisgood (1991), Immobilized Enzym: Applications to
Bioprocessing of Food, Department of Food Scien, University
Biotechnology Program, USA, pp. 309 – 313.
29. Horikoshi Koki (1999), Alkaliphiles:Some applications of their products
for biotechnology, Microbiology and molecular biology reviews.
30. Harry Seeley, Jonh Lee (1994), Laboratory manual of Microbiology, pp
437.
31. Haq, I.; Ashraf, H.; Iqbal, J. (2003), Production of alpha-amylase by
Bacillus licheniformis using an economical medium, Bioresource
Technology.
32. K. Mathews, K.E Van Holde (1995), Biochemistry, The Benjamin/
Cummings, pp. 229-231.
33. Nam Sun Wang (2001), Starch hydrolysis by amylase, Department of
Chemical Engineering, University of Maryland.
37. Pandey A. et. Al (2000), Advences in microbial amylase, Biotechnology
and Applied Biochemistry.
38. Sonenshein, A. L.; Hoch, J. A.; Losick, R. (1993), Bacillus subtilis and
other Gram-positive Bacteria: biochemistry physiology and
molecular genetics, American Society for Microbiology.
39. Todar, K. Ph. D (2008), Bacillus and related endospore-forming
bacteria, Todar’s online textbook of bacteriology.
Ñòa chæ truy caäp Internet
43.
44.
+enzyme+alpha+amylase vi+khu%E1%BA%A9n+Bacillus&zone=vn.
45.
46.
47.
48.
49.
50. www.glue.umd.edu/~nsw/ench485/lab5.html.
PHUÏ LUÏC
Soá: 48779/0409/DVTN
KEÁT QUAÛ THÍ NGHIEÄM
THOÂNG TIN VEÀ MAÃU THÖÛ
Nôi gôûi maãu: Trường Đại Học Sư Phạm TPHCM
Maãu thöû: Chuûng CK
Yeâu caàu: Ñònh danh baèng phöông phaùp giaûi trình töï gen 16S rRNA
PHÖÔNG PHAÙP THÖÏC HIEÄN
Giaûi trình töï gen 16S rRNA vaø tra cöùu treân BLAST SEARCH
Keát quaû nhuoäm Gram
Tröïc khuaån Gram (+) Keát quaû caáy treân thaïch maùu
Keát quaû giaûi trình töï gen 16S rRNA
CATGCAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGA
CGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGG
AAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAA
AAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTT
GGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGT
GATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGC
AGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTG
AGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGT
ACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGC
TAACTACGTGCCA
PHOØNG XEÙT NGHIEÄM NK-BIOTEK
793/58 TRAÀN XUAÂN SOÏAN, P. TAÂN HÖNG, Q.7, TP. HCM
ÑT: (848) 7715818, 8328, 8329 Fax: (848) 7750583, 2250
Email: phhvan.nkbiotek@gmail.com, namkhoa.biotek@gmail.com
GP soá: 41G8005341
Theo ñònh höôùng ISO 15189
Keát quaû tra cöùu treân BLAST SEARCH
> gb|FJ263034.1| Bacillus subtilis strain RC22 16S ribosomal RNA gene,
partial
sequence
Length=1465
Score = 874 bits (473), Expect = 0.0
Identities = 473/473 (100%), Gaps = 0/473 (0%)
Strand=Plus/Plus
Query 1 CATGCAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGT 60
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sbjct 26 CATGCAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGT 85
Query 61 AACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCG 120
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sbjct 86 AACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCG 145
Query 121 GATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGA 180
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sbjct 146 GATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGA 205
Query 181 TGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTA 240
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sbjct 206 TGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTA 265
Query 241 GCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGG 300
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sbjct 266 GCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGG 325
Query 301 AGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAG 360
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sbjct 326 AGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAG 385
Query 361 TGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAAT 420
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sbjct 386 TGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAAT 445
Query 421 AGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCA 473
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sbjct 446 AGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCA 498
KEÁT LUAÄN
Bacillus subtilis
TP. Hoà Chí Minh, ngaøy 17 thaùng 04 naêm 2009
TRÖÔÛNG PHOØNG
y = 24.035x
R2 = 0.9996
0
1
2
3
4
5
6
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25
Delta OD
H
aøm
lö
ôïn
g
tin
h
bo
ät
(m
g/
m
l)
1. ÑOÀ THÒ CHUAÅN TINH BOÄT ÑEÅ XAÙC ÑÒNH HOAÏT ÑOÄ AMYLASE
(THEO PHÖÔNG PHAÙP HEINKEL)
Baûng 1.1. Döïng ñöôøng chuaån tinh boät
OÁng soá 1 2 3 4 5 6
Haøm löôïng tinh boät
(mg/ml)
0 1 2 3 4 5
OD (560nm) 0,002 0,044 0,086 0,126 0,171 0,208
Delta OD 0 0,042 0,084 0,124 0,169 0,206
Ñoà thò 1.1. Söï töông quan giöõa ΔOD560nm vaø haøm löôïng tinh boät (mg/ml)
2. Xaùc ñònh hoaït ñoä amylase cuûa 3 chuûng CK
Baûng 2. So saùnh hoaït ñoä amylase cuûa 3 chuûng CK
Soá laàn ño Chuûng
1 2 3
Trung
bình
Sai soá
Delta OD 0,208 0,197 0,213 0,206 0,005
Löôïng tinh boät(mg/ml) 4,999 4,735 5,119 4,951 0,114 CK 1
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 10,50 9,94 10,75 10,398 0,239
Delta OD 0,321 0,315 0,325 0,320 0,003
Löôïng tinh boät(mg/ml) 7,715 7,571 7,811 7,699 0,070 CK 2
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 16,20 15,90 16,40 16,168 0,147
Delta OD 0,184 0,178 0,18 0,181 0,002
Löôïng tinh boät(mg/ml) 4,422 4,278 4,326 4,342 0,042 CK 3
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 9,29 8,98 9,09 9,119 0,089
3. Nghieân cöùu caùc ñieàu kieän aûnh höôûng tôùi khaû naêng sinh toång hôïp α –
amylase cuûa chuûng CK2.
Baûng 3.1. AÛnh höôûng loaïi cô chaát laø boät gaïo ñeán hoaït ñoä amylase
Soá laàn ño Thôøi
gian
(h)
1 2 3
Trung
bình
Sai soá
Delta OD 0,045 0,042 0,045 0,044 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 1,082 1,009 1,082 1,058 0,024 20
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 2,271 2,120 2,271 2,221 0,050
Delta OD 0,083 0,082 0,083 0,083 0,0003
Löôïng tinh boät(mg/ml) 1,995 1,971 1,995 1,987 0,008 30
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 4,189 4,139 4,189 4,172 0,017
Delta OD 0,128 0,127 0,130 0,128 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 3,076 3,052 3,125 3,084 0,021 40
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 6,461 6,410 6,562 6,477 0,045
Delta OD 0,166 0,165 0,163 0,165 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 3,990 3,966 3,918 3,958 0,021 45
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 8,379 8,328 8,227 8,311 0,045
Delta OD 0,160 0,165 0,164 0,163 0,002
Löôïng tinh boät(mg/ml) 3,846 3,966 3,942 3,918 0,037 50
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 8,076 8,328 8,278 8,227 0,077
Delta OD 0,160 0,158 0,158 0,159 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 3,846 3,798 3,798 3,814 0,016 55
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 8,076 7,975 7,975 8,008 0,034
Delta OD 0,151 0,152 0,156 0,153 0,002
Löôïng tinh boät(mg/ml) 3,629 3,653 3,749 3,677 0,037 60
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 7,621 7,672 7,874 7,722 0,077
Delta OD 0,144 0,138 0,142 0,141 0,002
Löôïng tinh boät(mg/ml) 3,461 3,317 3,413 3,397 0,042 70
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 7,268 6,965 7,167 7,134 0,089
Baûng 3.2. AÛnh höôûng loaïi cô chaát laø boät myø ñeán hoaït ñoä amylase
Soá laàn ño Thôøi
gian
(h)
1 2 3
Trung
bình
Sai soá
Delta OD 0,077 0,074 0,076 0,076 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 1,851 1,779 1,827 1,819 0,021 20
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 3,886 3,735 3,836 3,819 0,045
Delta OD 0,099 0,102 0,104 0,102 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 2,379 2,452 2,500 2,444 0,035 30
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 4,997 5,148 5,249 5,131 0,073
Delta OD 0,131 0,129 0,129 0,130 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 3,149 3,101 3,101 3,117 0,016 40
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 6,612 6,511 6,511 6,545 0,034
Delta OD 0,151 0,155 0,150 0,152 0,002
Löôïng tinh boät(mg/ml) 3,629 3,725 3,605 3,653 0,037 45
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 7,621 7,823 7,571 7,672 0,077
Delta OD 0,150 0,148 0,150 0,149 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 3,605 3,557 3,605 3,589 0,016 50
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 7,571 7,470 7,571 7,537 0,034
Delta OD 0,148 0,147 0,148 0,148 0,0003
Löôïng tinh boät(mg/ml) 3,557 3,533 3,557 3,549 0,008 55
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 7,470 7,420 7,470 7,453 0,017
Delta OD 0,147 0,143 0,145 0,145 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 3,533 3,437 3,485 3,485 0,028 60
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 7,420 7,218 7,319 7,319 0,058
Delta OD 0,132 0,130 0,129 0,130 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 3,173 3,125 3,101 3,133 0,021 70
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 6,663 6,562 6,511 6,578 0,045
Baûng 3.3. AÛnh höôûng loaïi cô chaát laø boät baép ñeán hoaït ñoä amylase
Soá laàn ño Thôøi
gian
(h)
1 2 3
Trung
bình
Sai soá
Delta OD 0,079 0,077 0,077 0,078 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 1,899 1,851 1,851 1,867 0,016 20
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 3,987 3,886 3,886 3,920 0,034
Delta OD 0,126 0,122 0,128 0,125 0,002
Löôïng tinh boät(mg/ml) 3,028 2,932 3,076 3,012 0,042 30
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 6,360 6,158 6,461 6,326 0,089
Delta OD 0,158 0,159 0,162 0,160 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 3,798 3,822 3,894 3,838 0,029 40
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 7,975 8,025 8,177 8,059 0,061
Delta OD 0,202 0,205 0,200 0,202 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 4,855 4,927 4,807 4,863 0,035 45
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 10,196 10,347 10,095 10,212 0,073
Delta OD 0,200 0,199 0,203 0,201 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 4,807 4,783 4,879 4,823 0,029 50
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 10,095 10,044 10,246 10,128 0,061
Delta OD 0,197 0,196 0,199 0,197 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 4,735 4,711 4,783 4,743 0,021 55
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 9,943 9,893 10,044 9,960 0,045
Delta OD 0,182 0,184 0,180 0,182 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 4,374 4,422 4,326 4,374 0,028 60
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 9,186 9,287 9,085 9,186 0,058
Delta OD 0,168 0,167 0,167 0,167 0,0003
Löôïng tinh boät(mg/ml) 4,038 4,014 4,014 4,022 0,008 70
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 8,480 8,429 8,429 8,446 0,017
Baûng 3.4. AÛnh höôûng loaïi cô chaát laø tinh boät tan ñeán hoaït ñoä amylase
Soá laàn ño Thôøi
gian
(h)
1 2 3
Trung
bình
Sai soá
Delta OD 0,098 0,096 0,098 0,097 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 2,355 2,307 2,355 2,339 0,016 20
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 4,946 4,845 4,946 4,913 0,034
Delta OD 0,144 0,148 0,148 0,147 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 3,461 3,557 3,557 3,525 0,032 30
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 7,268 7,470 7,470 7,403 0,067
Delta OD 0,202 0,205 0,203 0,203 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 3,461 3,485 3,461 3,469 0,008 40
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 10,196 10,347 10,246 10,263 0,045
Delta OD 0,293 0,297 0,295 0,295 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 4,374 4,422 4,326 4,374 0,028 45
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 14,789 14,991 14,890 14,890 0,058
Delta OD 0,288 0,290 0,293 0,290 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 6,922 6,970 7,042 6,978 0,035 50
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 14,536 14,637 14,789 14,654 0,073
Delta OD 0,285 0,285 0,287 0,286 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 6,850 6,850 6,898 6,866 0,016 55
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 14,385 14,385 14,486 14,419 0,034
Delta OD 0,276 0,274 0,270 0,273 0,002
Löôïng tinh boät(mg/ml) 6,634 6,586 6,489 6,570 0,042 60
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 13,931 13,830 13,628 13,796 0,089
Delta OD 0,246 0,249 0,249 0,248 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 5,913 5,985 5,985 5,961 0,024 70
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 12,416 12,568 12,568 12,517 0,050
Baûng 3.5. AÛnh höôûng noàng ñoä tinh boät tan ñeán hoaït ñoä amylase
Soá laàn ño noàng
ñoä
tinh
boät
tan
(%)
1 2 3
Trung
bình
Sai soá
Delta OD 0,184 0,186 0,186 0,185 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 4,422 4,471 4,471 4,454 0,016 0,5
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 9,287 9,388 9,388 9,354 0,034
Delta OD 0,267 0,266 0,261 0,265 0,002
Löôïng tinh boät(mg/ml) 6,417 6,393 6,273 6,361 0,045 1,0
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 13,476 13,426 13,174 13,359 0,094
Delta OD 0,322 0,326 0,325 0,324 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 7,739 7,835 7,811 7,795 0,029 1,5
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 16,252 16,454 16,404 16,370 0,061
Delta OD 0,281 0,283 0,280 0,281 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 6,754 6,802 6,730 6,762 0,021
2,0 Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 14,183 14,284 14,133 14,200 0,045
Delta OD 0,188 0,185 0,188 0,187 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 4,519 4,446 4,519 4,495 0,024 2,5
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 9,489 9,338 9,489 9,439 0,050
Baûng 3.6. Nhieät ñoä aûnh höôûng ñeán hoaït ñoä amylase
Soá laàn ño Nhieät
ñoä
(0C)
1 2 3
Trung
bình
Sai soá
Delta OD 0,279 0,277 0,275 0,277 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 6,706 6,658 6,610 6,658 0,028 25-28
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 14,082 13,981 13,880 13,981 0,058
Delta OD 0,411 0,415 0,412 0,413 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 9,878 9,975 9,902 9,918 0,029 30-33
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 20,745 20,947 20,795 20,829 0,061
Delta OD 0,632 0,635 0,634 0,634 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 15,190 15,262 15,238 15,230 0,021 35-37
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 31,899 32,051 32,000 31,983 0,045
Delta OD 0,565 0,560 0,562 0,562 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 13,580 13,460 13,508 13,516 0,035 38-40
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 28,518 28,265 28,366 28,383 0,073
Delta OD 0,476 0,474 0,478 0,476 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 11,441 11,393 11,489 11,441 0,028 40-42
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 24,025 23,924 24,126 24,025 0,058
Delta OD 0,371 0,371 0,377 0,373 0,002
Löôïng tinh boät(mg/ml) 8,917 8,917 9,061 8,965 0,048 42-45
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 18,726 18,726 19,029 18,827 0,101
Baûng 3.7. AÛnh höôûng cuûa pH ban ñaàu
Soá laàn ño
pH
1 2 3
Trung
bình
Sai soá
Delta OD 0,021 0,024 0,023 0,023 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 0,505 0,577 0,553 0,545 0,021 5,0
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 1,060 1,211 1,161 1,144 0,045
Delta OD 0,032 0,030 0,034 0,032 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 0,769 0,721 0,817 0,769 0,028 5,5
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 1,615 1,514 1,716 1,615 0,058
Delta OD 0,176 0,177 0,176 0,176 0,000
Löôïng tinh boät(mg/ml) 4,230 4,254 4,230 4,238 0,008 6,0
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 8,883 8,934 8,883 8,900 0,017
Delta OD 0,298 0,298 0,290 0,295 0,003
Löôïng tinh boät(mg/ml) 7,162 7,162 6,970 7,098 0,064 6,5
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 15,041 15,041 14,637 14,907 0,135
Delta OD 0,477 0,478 0,472 0,476 0,002
Löôïng tinh boät(mg/ml) 11,465 11,489 11,345 11,433 0,0457,0
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 24,076 24,126 23,823 24,009 0,094
Delta OD 0,545 0,546 0,550 0,547 0,002
Löôïng tinh boät(mg/ml) 13,099 13,123 13,219 13,147 0,037 7,5
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 27,508 27,559 27,760 27,609 0,077
Delta OD 0,311 0,308 0,310 0,310 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 7,475 7,403 7,451 7,443 0,021 8,0
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 15,697 15,546 15,647 15,630 0,045
Delta OD 0,101 0,096 0,098 0,098 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 2,428 2,307 2,355 2,363 0,035 8,5
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 5,098 4,845 4,946 4,963 0,073
Baûng3.8. AÛnh höôûng cuûa ñoä hieáu khí ñeán hoaït ñoä amylase
Soá laàn ño Theå
tích
dòch
nuoâi
caáy
(ml)
1 2 3
Trung
bình
Sai
soá
Delta OD 0,327 0,324 0,324 0,325 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 7,859 7,787 7,787 7,811 0,02450
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 16,505 16,353 16,353 16,404 0,050
Delta OD 0,440 0,443 0,444 0,442 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 10,575 10,648 10,672 10,631 0,02975
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 22,208 22,360 22,410 22,326 0,061
Delta OD 0,558 0,560 0,558 0,559 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 13,412 13,460 13,412 13,428 0,016100
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 28,164 28,265 28,164 28,198 0,034
Delta OD 0,329 0,328 0,326 0,328 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 7,908 7,883 7,835 7,875 0,021150
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 16,606 16,555 16,454 16,538 0,045
Delta OD 0,264 0,264 0,266 0,265 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 6,345 6,345 6,393 6,361 0,016200
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 13,325 13,325 13,426 13,359 0,034
Delta OD 0,215 0,210 0,213 0,213 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 5,168 5,047 5,119 5,111 0,035250
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 10,852 10,599 10,751 10,734 0,073
Delta OD 0,182 0,184 0,184 0,183 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 4,374 4,422 4,422 4,406 0,016300
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 9,186 9,287 9,287 9,253 0,034
Baûng 3.9. AÛnh höôûng cuûa noàng ñoä NaCl
Soá laàn ño NaCl
(%)
1 2 3
Trung
bình
Sai soá
Delta OD 0,081 0,085 0,084 0,083 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 1,947 2,043 2,019 2,003 0,029 0
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 4,088 4,290 4,240 4,206 0,061
Delta OD 0,231 0,234 0,234 0,233 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 5,552 5,624 5,624 5,600 0,024 0,03
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 11,659 11,811 11,811 11,760 0,050
Delta OD 0,388 0,385 0,388 0,387 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 9,326 9,253 9,326 9,302 0,024 0,05
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 19,584 19,432 19,584 19,533 0,050
Delta OD 0,806 0,805 0,806 0,806 0,000
Löôïng tinh boät(mg/ml) 19,372 19,348 19,372 19,364 0,008 0,08
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 40,682 40,631 40,682 40,665 0,017
Delta OD 0,662 0,666 0,663 0,664 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 15,911 16,007 15,935 15,951 0,029 0,1
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 33,413 33,615 33,464 33,498 0,061
Delta OD 0,525 0,527 0,525 0,526 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 12,618 12,666 12,618 12,634 0,016 0,12
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 26,499 26,600 26,499 26,532 0,034
Baûng 3.10. AÛnh höôûng cuûa noàng ñoä CaCl2
Soá laàn ño
%CaCl2 1 2 3
Trung
bình
Sai
soá
Delta OD 0,481 0,485 0,483 0,483 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 11,561 11,657 11,609 11,609 0,0280
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 24,278 24,480 24,379 24,379 0,058
Delta OD 0,568 0,565 0,565 0,566 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 13,652 13,580 13,580 13,604 0,0240,01
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 28,669 28,518 28,518 28,568 0,050
Delta OD 0,455 0,458 0,456 0,456 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 10,936 11,008 10,960 10,968 0,0210,015
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 22,965 23,117 23,016 23,033 0,045
Delta OD 0,404 0,405 0,408 0,406 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 9,710 9,734 9,806 9,750 0,0290,02
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 20,391 20,442 20,593 20,475 0,061
Delta OD 0,378 0,373 0,375 0,375 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 9,085 8,965 9,013 9,021 0,0350,025
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 19,079 18,827 18,928 18,944 0,073
4. Nghieân cöùu ñoäng hoïc cuûa quaù trình leân men chuûng CK2 trong bình tam
giaùc 1 lít.
Baûng 4. Hoaït ñoä amylase trong quaù trình nghieân cöùu ñoäng hoïc
Soá laàn ño Thôøi
gian
(h)
1 2 3
Trung
bình
Sai soá
Delta OD 0,385 0,388 0,387 0,387 0,001
Löôïng tinh boät (mg/ml) 9,253 9,326 9,302 9,294 0,021 20
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 19,432 19,584 19,533 19,516 0,045
Delta OD 0,421 0,425 0,424 0,423 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 10,119 10,215 10,191 10,175 0,029 30
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 21,249 21,451 21,401 21,367 0,061
Delta OD 0,504 0,508 0,505 0,506 0,001
Löôïng tinh boät(mg/ml) 12,114 12,210 12,138 12,154 0,029 35
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 25,439 25,641 25,489 25,523 0,061
Delta OD 0,639 0,640 0,644 0,641 0,002
Löôïng tinh boät(mg/ml) 15,358 15,382 15,479 15,406 0,037 40
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 32,253 32,303 32,505 32,354 0,077
Delta OD 0,880 0,885 0,885 0,883 0,002
Löôïng tinh boät(mg/ml) 21,151 21,271 21,271 21,231 0,040 45
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 44,417 44,669 44,669 44,585 0,084
Delta OD 0,871 0,875 0,878 0,875 0,002
Löôïng tinh boät(mg/ml) 20,934 21,031 21,103 21,023 0,049 50
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 43,962 44,164 44,316 44,147 0,102
Delta OD 0,849 0,853 0,855 0,852 0,002
Löôïng tinh boät(mg/ml) 20,406 20,502 20,550 20,486 0,042 55
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 42,852 43,054 43,155 43,020 0,089
Delta OD 0,797 0,803 0,808 0,803 0,003
Löôïng tinh boät(mg/ml) 19,156 19,300 19,420 19,292 0,076 60
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 40,227 40,530 40,783 40,513 0,160
Delta OD 0,751 0,756 0,757 0,755 0,002
Löôïng tinh boät(mg/ml) 18,050 18,170 18,194 18,138 0,045 70
Hoaït ñoä amylase (UI/ml) 37,906 38,158 38,208 38,091 0,094
5. Hoaït ñoä cuûa CPE amylase thu ñöôïc bôûi caùc taùc nhaân tuûa
Baûng 5. Hoaït ñoä cuûa CPE amylase (UI/g CPE) thu ñöôïc bôûi caùc taùc nhaân tuûa
Soá laàn ño Taùc
nhaân
tuûa
1 2 3
Trung
bình
Sai soá
Delta OD 0,861 0,867 0,864 0,864 0,002
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
20,694 20,838 20,766 20,766 0,042etanol
960C
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
10864 10940 10902 10902,28 21,86
Delta OD 0,678 0,675 0,674 0,676 0,001
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
16,296 16,224 16,200 16,240 0,029aceton
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
8555,3 8517,4 8504,8 8525,82 15,17
Delta OD 0,314 0,318 0,313 0,315 0,002
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
7,547 7,6431 7,523 7,571 0,037sulphate
amon
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
3962,2 4012,6 3949,6 3974,79 19,27
6. Ñoä beàn nhieät cuûa CPE amylase
Baûng 6. Ñoä beàn nhieät cuûa CPE amylase
Soá laàn ño Nhiệt
ñoä
(0C)
1 2 3
Trung
bình
Sai soá
Delta OD 0,876 0,879 0,868 0,874 0,003
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
21,055 21,127 20,862 21,015 0,0794
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
11053,70 11091,55 10952,75 11032,67 41,43
Delta OD 0,873 0,872 0,876 0,874 0,001
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
20,983 20,959 21,055 20,999 0,02930
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
11015,84 11003,22 11053,70 11024,25 15,17
Delta OD 0,848 0,849 0,845 0,847 0,001
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
20,382 20,406 20,310 20,366 0,02940
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
10700,38 10713,00 10662,53 10691,97 15,17
Delta OD 0,809 0,812 0,81 0,810 0,001
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
19,444 19,516 19,468 19,476 0,02150
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
10208,27 10246,12 10220,88 10225,09 11,13
Delta OD 0,766 0,769 0,771 0,769 0,001
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
18,411 18,483 18,531 18,475 0,03560
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
9665,68 9703,53 9728,77 9699,32 18,33
Delta OD 0,696 0,698 0,696 0,697 0,00170
Löôïng tinh boät 16,728 16,776 16,728 16,744 0,016
(mg/ml)
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
8782,39 8807,63 8782,39 8790,80 8,41
Delta OD 0,313 0,318 0,314 0,315 0,002
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
7,523 7,6431 7,547 7,571 0,03780
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
3949,55 4012,64 3962,17 3974,79 19,27
Delta OD 0,009 0,006 0,006 0,007 0,001
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
0,216 0,1442 0,1442 0,168 0,02490
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
113,57 75,71 75,71 88,33 12,62
100 Delta OD 0 0 0 0 0,00
7. Ñoä beàn pH cuûa CPE amylase
Baûng 7. Ñoä beàn pH cuûa CPE amylase
Soá laàn ño
pH
1 2 3
Trung
bình
Sai soá
Delta OD 0,056 0,056 0,058 0,057 0,001
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
1,346 1,346 1,394 1,362 0,0164,0
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
706,63 706,63 731,87 715,04 8,41
Delta OD 0,333 0,332 0,335 0,333 0,001
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
8,004 7,980 8,052 8,012 0,0214,5
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
4201,92 4189,30 4227,16 4206,13 11,13
Delta OD 0,662 0,664 0,662 0,663 0,0015,0
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
15,911 15,959 15,911 15,927 0,016
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
8353,36 8378,60 8353,36 8361,78 8,41
Delta OD 0,805 0,809 0,807 0,807 0,001
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
19,348 19,444 19,396 19,396 0,0285,5
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
10157,7
9
10208,2
7
10183,0
3
10183,03 14,57
Delta OD 0,903 0,905 0,903 0,904 0,001
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
21,704 21,752 21,704 21,720 0,0166,0
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
11394,3
9
11419,6
3
11394,3
9
11402,81 8,41
Delta OD 0,848 0,845 0,844 0,846 0,001
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
20,382 20,310 20,286 20,326 0,0296,5
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
10700,3
8
10662,5
3
10649,9
1
10670,94 15,17
Delta OD 0,736 0,738 0,735 0,736 0,001
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
17,690 17,738 17,666 17,698 0,0217,0
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
9287,12 9312,36 9274,51 9291,33 11,13
Delta OD 0,664 0,668 0,667 0,666 0,001
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
15,959 16,055 16,031 16,015 0,0297,5
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
8378,60 8429,07 8416,46 8408,04 15,17
Delta OD 0,464 0,461 0,466 0,464 0,001
Löôïng tinh boät
(mg/ml)
11,152 11,080 11,200 11,144 0,0358,0
Hoaït ñoä amylase
(UI/g CPE)
5854,93 5817,07 5880,16 5850,72 18,33
Lôøi Caûm Ôn
დ Toâi xin chaân thaønh baøy toû loøng bieát ôn saâu saéc ñeán:
PGS.TS. Löông Ñöùc Phaåm ñaõ taän tình höôùng daãn, luoân ñoäng vieân
vaø taïo moïi ñieàu kieän toát nhaát cho toâi hoaøn thaønh luaän vaên naøy.
დ Toâi xin gôûi lôøi caûm ôn chaân thaønh ñeán:
TS. Traàn Thanh Thuyû vaø caùc Caùn boä phoøng thí nghieäm Vi sinh -
Sinh hoaù – Tröôøng Ñaïi hoïc Sö phaïm TP. HCM.
Quyù Thaày, Coâ tröïc tieáp giaûng daïy.
Phoøng Khoa hoïc Coâng ngheä Sau ñaïi hoïc - Tröôøng Ñaïi hoïc Sö
phaïm TP. HCM.
Ban Giaùm hieäu – Tröôøng THPT Nguyeãn Traõi vaø Tröôøng THPT
chuyeân Leâ Quyù Ñoân – tænh Ninh Thuaän.
Caùc Caùn boä phoøng thí nghieäm Sinh hoaù – Tröôøng Ñaïi hoïc Khoa
hoïc Töï nhieân.
Vaø caùc baïn beø, ñoàng nghieäp.
Ñaõ truyeàn ñaït kieán thöùc, chia seû, ñoäng vieân tinh thaàn vaø taïo moïi
ñieàu kieän giuùp ñôõ toâi trong thôøi gian hoïc taäp vaø thöïc hieän ñeà taøi.
დ Cuoái cuøng toâi xin ghi nhaän tình caûm yeâu thöông cuûa nhöõng ngöôøi
thaân trong gia ñình, luoân uûng hoä, ñoäng vieân toâi vöôït qua nhöõng khoù
khaên trong cuoäc soáng cuõng nhö trong coâng taùc.
NGUYEÃN THÒ HOAØNG HAÛI
CAÙC CHÖÕ VIEÁT TAÉT TRONG LUAÄN VAÊN
B. subtilis : Bacillus subtilis
CPE : Cheá phaåm enzym
ÑVHÑ : Ñôn vò hoaït ñoä
OD : Giaù trò maät ñoä quang
Delta OD : Hieäu soá giaù trò maät ñoä quang
VSV : Vi sinh vaät
DANH MUÏC CAÙC BAÛNG
Trang
Baûng 1.1. Ñoä beàn nhieät cuûa α-amylase töø caùc nguoàn khaùc nhau…………………………. 17
Baûng 3.1. Ñöôøng kính phaân giaûi tinh boät cuûa 3 chuûng CK…………….…………………………44
Baûng 3.2. Söï sinh tröôûng cuûa 3 chuûng CK………………………………………………………….………...45
Baûng 3.3. So saùnh hoaït ñoä amylase cuûa 3 chuûng CK…………………………………………………46
Baûng 3.4. Moät soá ñaëc ñieåm sinh hoïc cuûa chuûng CK2…………………………………………………49
Baûng 3.5. AÛnh höôûng loaïi cô chaát ñeán hoaït ñoä amylase……………………………………..……50
Baûng 3.6. Noàng ñoä tinh boät tan aûnh höôûng ñeán hoaït ñoä amylase…………………..…….52
Baûng 3.7. Nhieät ñoä aûnh höôûng ñeán hoaït ñoä amylase………………………………………….………53
Baûng 3.8. AÛnh höôûng pH ban ñaàu ñeán hoaït ñoä amylase………………………………….….……54
Baûng 3.9. AÛnh höôûng cuûa ñoä hieáu khí ñeán hoaït ñoä amylase……………………….………..55
Baûng 3.10. AÛnh höôûng cuûa noàng ñoä muoái NaCl ñeán hoaït ñoä amylase…….………..57
Baûng 3.11. AÛnh höôûng noàng ñoä CaCl2 ñeán hoaït tính amylase……………………………….58
Baûng 3.12. Noàng ñoä NaCl cao nhaát öùc cheá sinh tröôûng…………………………………….………59
Baûng 3.13. Nghieân cöùu ñoäng hoïc quaù trình leân men Bacillus subtilis CK2……….61
Baûng 3.14. Thu nhaän cheá phaåm enzym (CPE) amylase töø caùc taùc nhaân tuûa…….62
Baûng 3.15. Hoaït ñoä cuûa CPE amylase khi duøng caùc taùc nhaân tuûa……….………….…63
Baûng 3.16. Ñoä beàn nhieät cuûa amylase………………………………………………………….…………..…...64
Baûng 3.17 . Ñoä beàn pH cuûa amylase………………………..………………………………………………………66
DANH MUÏC CAÙC HÌNH, ÑOÀ THÒ VAØ BIEÅU ÑOÀ
Trang
Hình 1.1. Caáu truùc phaân töû α-amylase……………………………………………………………………………..16
Hình 3.1. Voøng phaân giaûi tinh boät cuûa 3 chuûng CK……………………….…………………………..44
Hình 3.2. Hình thaùi khuaån laïc chuûng CK2……………………………………………………………………..47
Hình 3.3. Hình thaùi teá baøo chuûng CK2…………………………………………………………………………….48
Hình 3.4. Baøo töû cuûa chuûng CK2……………………………………………………………………………………….48
Hình 3.5. Trình töï 16S-rARN cuûa chuûng CK2……………………………………………………………..60
Ñoà thò 3.1. So saùnh söï sinh tröôûng cuûa 3 chuûng CK…………………………………………………….45
Ñoà thò 3.2. AÛnh höôûng caùc loaïi cô chaát ñeán hoaït ñoä amylase………………………………..51
Ñoà thò 3.3. Ñoäng hoïc quaù trình nuoâi caáy B. subtilis CK2 sinh α-amylase…….…….61
Bieåu ñoà 3.1. So saùnh hoaït ñoä amylase cuûa 3 chuûng CK…………………………………….…….46
Bieåu ñoà 3.2. Noàng ñoä tinh boät tan aûnh höôûng ñeán hoaït ñoä amylase…………..………53
Bieåu ñoà 3.3. Nhieät ñoä aûnh höôûng ñeán hoaït ñoä amylase………………………………..….………54
Bieåu ñoà 3.4. AÛnh höôûng pH ban ñaàu ñeán hoaït ñoä amylase…………………………….…….…55
Bieåu ñoà 3.5. AÛnh höôûng cuûa ñoä hieáu khí ñeán hoaït ñoä amylase………………….….……..56
Bieåu ñoà 3.6. AÛnh höôûng cuûa noàng ñoä NaCl ñeán hoaït ñoä amylase………………………..57
Bieåu ñoà 3.7. AÛnh höôûng noàng ñoä CaCl2 ñeán hoaït tính amylase…………………………….58
Bieåu ñoà 3.8. Noàng ñoä NaCl cao nhaát öùc cheá sinh tröôûng…………………………………….……59
Bieåu ñoà 3.9. Hieäu suaát thu nhaän CPE amylase bôûi caùc taùc nhaân tuûa khaùc nhau……….62
Bieåu ñoà 3.10. Hoaït ñoä cuûa CPE amylase khi duøng caùc taùc nhaân tuûa…………….….…63
Bieåu ñoà 3.11. Ñoä beàn nhieät cuûa amylase…………………………………………………………………………64
Bieåu ñoà 3.12. Ñoä beàn pH cuûa amylase………………………….…………………………………………………66
MUÏC LUÏC
Trang
Trang phuï bìa
Lôøi caùm ôn
Muïc luïc
Caùc chöõ vieát taét trong luaän vaên
Danh muïc caùc baûng
Danh muïc caùc hình veõ, ñoà thò vaø bieåu ñoà
Môû ñaàu……………………..…………………………………………………………………………………………………….……………1
Chöông 1: TOÅNG QUAN TAØI LIEÄU…………………………………………………………….……………….4
1.1. Giống vi khuaån Bacillus ………………………………………………………………………………….……………..4
1.2. Khaùi quaùt chung veà enzym ………………………………………………………………………….………………..8
1.2.1. Enzym caûm öùng. ………………………………………………………………………….………………….………9
1.2.2. Baûn chaát sinh hoïc cuûa enzym. ……………………………………………………………….….………9
1.2.3. Baûn chaát hoaù hoïc cuûa enzym……………………………………………………….………….……….10
1.2.4. Tính chaát hoaù hoïc cuûa enzym……………………………………………………….………….………11
1.2.5. Caáu truùc enzym. ……………………………………………………………….….……………………………….11
1.2.6. Cô cheá taùc duïng cuûa enzym…………………………………………….…………….……….…………11
1.2.7. Caùc yeáu toá aûnh höôûng ñeán vaän toác phaûn öùng enzym……………………………..12
1.3. Heä enzym amylase………………………………………………………………………….………………………………15
1.3.1. Giôùi thieäu enzym α – amylase. ……………………………………………………………………….15
1.3.2 Nguoàn thu nhaän enzym amylase……………………………………………………………………….18
1.3.3 Moät soá yeáu toá aûnh höôûng ñeán sinh toång hôïp amylase cuûa VSV……….…19
1.3.4. Taùch chieát enzym töø caùc nguoàn nguyeân lieäu…………………….……………………….22
1.3.5 ÖÙng duïng cuûa amylase trong thöïc teá saûn xuaát vaø ñôøi soáng …………….……23
Chương II: VAÄT LIEÄU VAØ PHÖÔNG PHAÙP NGHIEÂN CÖÙU……………………….27
2.1 Vaät lieäu……………………………………………………………………………………………………………………………….27
2.2. Caùc moâi tröôøng ñöôïc söû duïng.………………………………………………………………………………28
2.3. Caùc phöông phaùp nghieân cöùu………………………………………………………………………………….28
2.3.1. Phöông phaùp phaân laäp caùc chuûng Bacillus töø ñaát vöôøn qua coû khoâ….28
2.3.2. Phöông phaùp giöõ gioáng caáy chuyeàn……………………………………….….………………...29
2.3.3. Moät soá phöông phaùp nghieân cöùu ñaëc ñieåm sinh hoïc cuûa Bacillus…….29
2.3.4. Phöông phaùp xaùc ñònh söï sinh tröôûng theo maät ñoä quang……………………..32
2.3.5. Phöông phaùp nghieân cöùu khaû naêng phaân huyû tinh boät……………………………32
2.3.6. Phöông phaùp xaùc ñònh hoaït ñoä α- amylase theo Heinkel, 1956………….33
2.3.7. Caùc phöông phaùp nghieân cöùu xaùc ñònh ñieàu kieän nuoâi caáy………………….35
2.3.8. Phöông phaùp phaân loaïi ñeå xaùc ñònh loaøi ……………………………………….….……….37
2.3.9. Phöông phaùp nghieân cöùu ñoäng hoïc……………………………………….….………………….38
2.3.10. Phöông phaùp thu nhaän dòch chieát enzym amylase töø moâi tröôøng…….39
2.3.11. Phöông phaùp thu nhaän CPE α – amylase……………………………………………………39
2.3.12. Xaùc ñònh hoaït ñoä CPE amylase thu ñöôïc töø caùc taùc nhaân tuûa……………41
2.3.13. Xaùc ñònh ñoä beàn cuûa CPE amylase……………………………………….….…………………41
2.3.14. Phöông phaùp xöû lyù soá lieäu thöïc nghieäm……………………………………….……………42
CHƯƠNG III: KEÁT QUAÛ VAØ THAÛO LUAÄN………………………………………………………..46
3.1. Phaân laäp, tuyeån choïn caùc chuûng coù hoaït tính amylase cao…………………..….44
3.2. Xaùc ñònh söï sinh tröôûng vaø hoaït ñoä amylase cuûa 3 chuûng CK……………..…45
3.3. Moät soá ñaëc ñieåm sinh hoïc cuûa chuûng CK2…………………………………………………..……47
3.4. Nghieân cöùu caùc ñieàu kieän sinh toång hôïp amylase…………….……………………………49
3.4.1. Loaïi cô chaát …………………………………………………………………………………………………………..49
3.4.2. AÛnh höôûng noàng ñoä tinh boät tan………………………………………………………………………52
3.4.3. AÛnh höôûng cuûa nhieät ñoä …………………………………………………………………………………..53
3.4.4. AÛnh höôûng cuûa pH ban ñaàu.……………………………………….…………………………………….54
3.4.5. AÛnh höôûng cuûa ñoä hieáu khí……………………………………………………………………………….55
3.4.6. AÛnh höôûng cuûa caùc loaïi muoái……………………………………………………………………………56
3.4.7. Noàng ñoä NaCl cao nhaát öùc cheá sinh tröôûng………………………………………………..59
3.5. Xaùc ñònh teân cuûa chuûng CK2 ñaõ tuyeån choïn……………………………………………………60
3.6. Nghieân cöùu ñoäng hoïc cuûa quaù trình leân men…………………………………………………..60
3.7. Taùch enzym töø dòch nuoâi caáy, xaùc ñònh hoaït ñoä vaø ñoä beàn cuûa enzym…62
3.7.1. Taùch enzym töø dòch nuoâi caáy vôùi caùc taùc nhaân tuûa khaùc nhau…………….62
3.7.2. Hoaït ñoä cuûa CPE amylase thu ñöôïc bôûi caùc taùc nhaân tuûa…………………….63
3.7.3. Xaùc ñònh ñoä beàn nhieät cuûa CPE amylase…………………………………………..……….64
3.7.4. Xaùc ñònh ñoä beàn pH cuûa CPE amylase……………………………………………………..…65
Chương IV: KEÁT LUAÄN VAØ KIEÁN NGHÒ……………………………………………………….…..67
TAØI LIEÄU THAM KHAÛO…………………………………………………………………………………………….…..69
PHUÏ LUÏC…………………………………………………………………………………………………………………………………73
Các file đính kèm theo tài liệu này:
LVSHVSV010.pdf
