KẾT LUẬN
Qua thực nghiệm mô phỏng mô hình gây
viêm khớp cấp và mạn tính trên chuột nhắt,
chúng tôi rút ra một số kết luận như sau:
- Trên mô hình gây viêm khớp cấp tính:
hỗn dịch carrageenan 2% làm sưng viêm
khớp gối, làm thay đổi hình ảnh vi thể khác
biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng. Mặc
dù điểm đau có gia tăng nhưng chưa đạt ý
nghĩa thống kê. Ketoprofen 2,5% có tác dụng
làm giảm mức độ sưng viêm và cải thiện tình
trạng viêm trên vi thể.
- Trên mô hình gây viêm khớp mạn tính:
tiêm cách quãng hỗn dịch carrageenan 2%
mỗi 3 ngày trong 19 ngày gây sưng viêm
khớp gối kéo dài. Sau khi ngưng tiêm tác
nhân gây viêm, tình trạng viêm khớp tiếp
tục được duy trì trên 7 ngày. Ketoprofen sử
dụng trong giai đoạn điều trị (từ ngày 20-27)
có tác dụng cải thiện tình trạng sưng viêm,
cấu trúc vi thể và mức độ đau trên mô hình
này.
- Với mức độ đáp ứng của cả 2 mô hình
khi điều trị bằng ketoprofen, chúng tôi cho
rằng cả 2 mô hình này đều có thể được ứng
dụng trong sàng lọc các thuốc có khả năng
điều trị, hỗ trợ điều trị viêm khớp.
6 trang |
Chia sẻ: hachi492 | Ngày: 09/02/2022 | Lượt xem: 27 | Lượt tải: 0
Bạn đang xem nội dung tài liệu Mô phỏng mô hình gây viêm khớp cấp và mạn tính bằng Carrageenan trên chuột nhắt, để tải tài liệu về máy bạn click vào nút DOWNLOAD ở trên
Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013
Chuyên Đề Dược Học 446
MÔ PHỎNG MÔ HÌNH GÂY VIÊM KHỚP CẤP VÀ MẠN TÍNH
BẰNG CARRAGEENAN TRÊN CHUỘT NHẮT
Trần Như Quỳnh*, Đỗ Thị Hồng Tươi*, Trần Mạnh Hùng*
TÓM TẮT
Đặt vấn đề: Với tỷ lệ mắc bệnh về cơ xương khớp ngày càng trở nên phổ biến ở Việt Nam, việc phát triển
mô hình sàng lọc thuốc có nguồn gốc tự nhiên để hỗ trợ điều trị, giảm tần suất sử dụng và hạn chế tác dụng phụ
của thuốc loại NSAID là rất cần thiết.
Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu được tiến hành trên chuột nhắt trắng chủng Swiss
albino với tác nhân gây viêm là carrageenan; mô hình mô phỏng là mô hình viêm khớp gối cấp và mạn tính.
Kết quả: Mô hình gây viêm khớp cấp: tiêm vào khớp gối ở chân phải sau liều duy nhất 5 µL hỗn dịch
carrageenan 2% gây viêm khớp cấp ở thời điểm 3 giờ sau khi tiêm, tăng cao nhất vào thời điểm 27 giờ và duy trì
trong 75 giờ. Mô hình này đáp ứng với thuốc đối chứng ketoprofen. Mô hình gây viêm khớp mạn: tiêm vào khớp
gối ở chân phải sau 5 µL hỗn dịch carrageenan 2% cách mỗi 3 ngày, 7 liều (từ ngày 1 đến ngày 19) gây viêm
khớp gối kéo dài và duy trì trên 1 tuần. Mô hình này đáp ứng với thuốc đối chứng là ketoprofen trong giai đoạn
điều trị (từ ngày 21-27).
Kết luận: Mô hình gây viêm khớp gối cấp và mạn tính có thể được ứng dụng để sàng lọc thuốc.
Từ khóa: Carrageenan, Viêm khớp, Mô hình chuột nhắt
ABTRACT
DEVELOPING MOUSE MODELS OF ACUTE AND CHRONIC ARTHRITIS
Tran Nhu Quynh, Do Thi Hong Tuoi, Tran Manh Hung
* Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 17 - Supplement of No 4 - 2013: 446 - 451
Introduction: With the increasing incidence of arthritis in Vietnamese population, available animal models
for screening anti-arthritis agents are needed.
Materials and Methods: This study was done in Swiss albino mouse with carrageenan as an
inflammatory-inducing agent to imitate mouse models of acute and chronic arthritis.
Results: Mouse model of acute arthritis: intra-articular injection of 5 µL of carrageenan 2% suspension
induced acute arthritis. Inflammation was manifested rapidly after injection of carrageenan and this response
reached maximum effect after 27 hours. Ketoprofen showed positive response when applied locally to
inflammatory area. Mouse model of chronic arthritis: intra-articular injection of 5 µL of carrageenan 2%
suspension every 3 days, 7 times (from day 1 to day 19) induced chronic arthritis and lasted for more than 7 days
(from day 21 to day 27). Ketoprofen showed positive response during treatment period (from day 21 to day 27)
when applied locally to inflammatory area.
Conclusions: These mouse models of acute and chronic arthritis could be applied for screening anti-
inflammatory agents.
Key words: Carrageenan, Arthritis, Mouse model
* Khoa Dược, ĐH Y Dược TP. Hồ Chí Minh
Tác giả liên lạc: PGS.TS. Trần Mạnh Hùng ĐT: 0937746596 Email: tranmanhhung@uphcm.edu.vn
Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 Nghiên cứu Y học
Chuyên Đề Dược Học 447
ĐẶT VẤN ĐỀ
Hiện nay các bệnh về cơ xương khớp nhất là
thấp khớp, viêm khớp cấp, mạn, thoái hóa khớp,
gai cột sống, viêm đa khớp ngày càng trở nên
phổ biến ở các nước khí hậu nhiệt đới như Việt
Nam. Triệu chứng toàn phát thường là khớp bị
viêm sưng, đau, đặc biệt đau nhiều về đêm,
cứng khớp buổi sáng dẫn đến hạn chế vận động.
Việc dùng thuốc hóa dược để điều trị những
bệnh này tồn tại một số nhược điểm nhất định
về vấn đề chi phí cũng như các tác dụng phụ của
thuốc trên dạ dày, ruột Chính vì thế, hiện nay
người ta có xu hướng dùng lại các phương pháp
thời xưa, gần gũi với thiên nhiên để hỗ trợ điều
trị, giảm số lượng sử dụng, hạn chế tác dụng
phụ của thuốc hóa dược, đặc biệt như các thuốc
kháng viêm nhóm NSAID.
Để có thể chứng minh hiệu quả của các
thuốc có nguồn gốc tự nhiên trên thực nghiệm,
điều cần thiết là phải mô phỏng được những mô
hình gây viêm khớp có khả năng ứng dụng. Từ
những lý do nêu trên, chúng tôi tiến hành đề tài
nghiên cứu “Mô phỏng mô hình viêm khớp cấp
tính và mạn tính bằng carrageenan trên chuột
nhắt’’ nhằm cung cấp các công cụ thực nghiệm
cho mục đích sàng lọc dược lý các thuốc có tiềm
năng điều trị, hỗ trợ điều trị viêm khớp.
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Thú vật thử nghiệm
Chuột nhắt trắng chủng Swiss albino, giống
đực, khỏe mạnh, không có biểu hiện bất thường,
có trọng lượng khoảng 24 ± 2 gam, do Viện Vắc-
xin và Sinh phẩm Y Tế Nha Trang cung cấp.
Hàng ngày chuột được cung cấp đầy đủ thức ăn
và nước uống.
Hóa chất và thuốc thử nghiệm:
Carrageenan được cung cấp bởi Sigma
Aldrich và pha thành hỗn dịch carrageenan 2%.
Thuốc đối chiếu là gel ketoprofen thoa da
(Profenid gel 2,5%, Sanofi Aventis), một NSAID
có tác động kháng viêm, giảm đau, sốt.
Phương pháp thử nghiệm
Mô phỏng mô hình gây viêm khớp cấp tính
bằng carrageenan trên chuột nhắt(1)
Chuột được gây viêm khớp cấp bằng cách
tiêm vào khớp gối chân phải sau liều duy nhất 5
µL hỗn dịch carrageenan 2%. Chu vi khớp gối
được đo trước khi tiêm và ở các thời điểm 3-27-
51-75 giờ sau khi tiêm carrageenan. Lô chứng
được tiêm dung dịch NaCl 0,9% và lô thử đáp
ứng của mô hình được thoa gel ketoprofen 2,5%
(10 mg, 2 lần/ngày), lên khớp gối chân. Theo dõi
và đánh giá mức độ gây viêm khớp của
carrageenan và đáp ứng của ketoproten dựa vào
mức độ sưng viêm ở khớp gối, mức độ đau và
hình ảnh vi thể.
Mô phỏng mô hình gây viêm khớp mạn tính(3)
Chuột được gây viêm khớp mạn tính bằng
cách tiêm vào khớp gối chân phải sau 5 µL hỗn
dịch carrageenan 2%, 7 liều cách mỗi 3 ngày
trong 19 ngày. Đánh giá mức độ gây viêm của
carrageenan (từ ngày 1 đến ngày 19) và mức độ
duy trì phản ứng viêm (từ ngày 20 đến ngày 27)
dựa trên sự sưng viêm, mức độ đau và hình ảnh
vi thể. Mô hình được thử đáp ứng bằng thuốc
đối chứng ketoprofen (đánh giá từ ngày 20 đến
ngày 27 với liều thoa tại chổ 10 mg lên khớp gối,
mỗi ngày 2 lần cách nhau 6 giờ vào thời điểm
nhất định trong ngày).
Đánh giá mức độ đau(2)
Chuột được đặt trong bocal thủy tinh trong
suốt đường kính 20 cm, cao 30 cm. Đặt máy quay
phim phía dưới bocal sao cho bao quát hết đáy
bocal. Tiến hành quay phim trong 5 phút khi
chuột hoạt động nhiều nhất. Đánh giá độ đau
của khớp theo thang điểm như sau:
0 = lực đặt chân bình thường, trọng lượng
đặt trên 2 chân như nhau.
1 = lực đặt lên chân nhẹ, bàn chân đặt hoàn
toàn trên sàn nhưng các ngón chân không trải
đều.
2 = lực đặt lên chân trung bình, bàn chân
cong với một phần chân chạm nhẹ lên đáy bocal.
Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013
Chuyên Đề Dược Học 448
3 = đau nặng, chân hoàn toàn đưa lên khỏi
đáy bocal.
Điểm 0,5-1,5- 2,5 cho biểu hiện ở giữa các
mức đã mô tả.
Phân tích mô học
Chuột được gây mê bằng đá CO2, cắt lấy
phần khớp gối (dài 2 cm), rửa sạch bằng nước
muối sinh lý NaCl 0,9% lạnh. Thấm khô và cố
định trong dung dịch formaldehyd 10% để phân
tích mô học bằng phương pháp nhuộm
hematoxylin-eosin tại Khoa Sinh hóa, Bệnh viện
Nhi Đồng 1, Thành phố Hồ Chí Minh. Mỗi một
lô được tiến hành làm vi phẩu trên 4 mẫu. Các
mẫu mô tả trong bài báo là các mẫu đại diện của
mỗi lô trong mô hình mạn tính.
Phân tích kết quả và thống kê
Kết quả được trình bày dưới dạng giá trị
trung bình ± sai số chuẩn của giá trị trung bình
(Mean ± SEM) và được đánh giá ý nghĩa thống
kê bằng phép kiểm Mann-Whitney.
KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
Mô phỏng mô hình gây viêm khớp cấp
bằng carrageenan
Chuột thí nghiệm được chia thành 3 lô sau:
- Lô chứng: tiêm vào khớp gối chân phải sau
liều duy nhất 5 µL dung dịch NaCl 0,9%
- Lô gây viêm khớp: tiêm vào khớp gối chân
phải sau liều duy nhất 5 µL hỗn dịch
Carrageenan 2%.
- Lô ketoprofen: chuột được tiêm vào
khớp gối chân phải sau liều duy nhất 5 µL
hỗn dịch carrageenan 2% + thoa 10 mg
ketoprofen 2,5% dạng gel lên khớp gối chân
(2 lần/ngày).
Sự thay đổi chu vi khớp gối chân chuột ở lô
chứng, lô bệnh và lô đối chứng tại các thời điểm
3 giờ, 27 giờ, 51 giờ, 75 giờ sau khi tiêm
carrageenan hoặc nước muối được thể hiện ở
hình 1.
Hình 1. Sự thay đổi chu vi khớp gối trước (0 giờ) và sau khi gây viêm (3-75 giờ) ở các lô thử nghiệm
Sau khi gây viêm chúng tôi nhận thấy chu vi
khớp gối chân chuột ở lô gây viêm bằng
carrageenan bắt đầu tăng vào thời điểm 3 giờ
sau khi tiêm, tăng tối đa ở thời điểm 27 giờ, sau
đó có xu hướng giảm xuống, tuy nhiên vẫn duy
trì được mức độ sưng viêm đạt ý nghĩa thống kê
so với lô chứng (P<0,05).
Ở lô được thoa gel ketoprofen, chu vi khớp
gối chân chuột thể hiện xu hướng giảm ngay sau
khi tiêm carrageenan 3 giờ và trở về mức bình
thường sau 27 giờ. Tác động làm giảm sưng
viêm của ketoprofen khác biệt đạt ý nghĩa thống
kê so với lô gây viêm.
Ở lô chứng, không có sự khác biệt đáng kể
về chu vi khớp gối trước và sau khi tiêm NaCl
0,9%, vì thế có thể cho rằng kỹ thuật tiêm không
Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 Nghiên cứu Y học
Chuyên Đề Dược Học 449
gây ảnh hưởng đến kết quả gây viêm bằng
carrageenan.
Mô phỏng mô hình gây viêm khớp mạn
tính bằng carrageenan
Thí nghiệm được tiến hành trên các lô thử
nghiệm sau:
- Lô chứng: tiêm vào khớp gối chân phải
sau 5 µL dung dịch NaCl 0,9% cách mỗi 3
ngày, với tổng số lần tiêm là 7 lần (từ ngày 1
đến ngày 19).
- Lô gây viêm khớp mạn tính: tiêm vào
khớp gối ở chân phải sau 5 µL hỗn dịch
carrageenan 2%, cách mỗi 3 ngày, với tổng
số lần tiêm là 7 lần (từ ngày 1 đến ngày 19).
- Lô ketoprofen: tiêm vào khớp gối ở
chân phải sau 5 µL hỗn dịch carrageenan 2%,
cách mỗi 3 ngày trong 19 ngày; từ ngày 20
đến ngày 27, thoa 10 mg ketoprofen 2,5%
dạng gel lên khớp gối chân, mỗi ngày 2 lần
cách nhau 6 giờ vào thời điểm nhất định
trong ngày.
Sau khi chuột được gây viêm khớp trong 19
ngày, mức độ duy trì viêm khớp và đáp ứng
kháng viêm của ketoprofen được đánh giá trong
7 ngày (từ ngày 20 đến ngày thứ 27). Độ giảm
chu vi khớp gối ở lô chứng, lô gây viêm và lô đối
chứng trong thời gian điều trị 7 ngày so với
trước khi điều trị được thể hiện ở hình 2.
Hình 2. Mức độ giảm chu vi khớp gối tính từ ngày 20 đến ngày 27 sau khi gây viêm ở các lô thử nghiệm
Ở lô gây viêm bằng carrageenan 2%, mức
độ sưng viêm khớp gối thể hiện rõ trong suốt
giai đoạn gây viêm (từ ngày 1 đến ngày 19).
Sau khi ngưng tiêm tác nhân gây viêm, mức
độ sưng viêm khớp gối tiếp tục được duy trì
trong suốt khoảng thời nghiên cứu (từ ngày 20
đến ngày 27).
Ở lô chứng, mặc dù cũng được tiêm liên tục
NaCl 0,9%, tuy nhiên không có sự biểu hiện của
sưng viêm khớp gối. Khi điều trị bằng
ketoprofen (từ ngày 20 đến ngày 27), mức độ
sưng viêm khớp gối giảm rõ rệt so với lô gây
viêm. Như vậy, ketoprofen cũng thể hiện rõ đáp
ứng trên mô hình này.
Khảo sát tác động giảm đau của ketoprofen
trên mô hình viêm khớp cấp và mạn tính
Thí nghiệm được tiến hành trên các lô thử
nghiệm đã được mô tả ở trên. Thang điểm đau
được đánh giá thông qua thang điểm đánh giá
hành vi đau ở khớp chuột với các mức độ từ 0-4
với 0 là không đau (lực đặt bàn chân lên bocal
bình thường) và 4 là đau nặng (phải nhất chân
khỏi đáy bocal). Kết quả thử nghiệm được trình
bày ở bảng 1 và bảng 2.
Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013
Chuyên Đề Dược Học 450
Bảng 1. Điểm đau của lô chứng, lô bệnh và lô đối
chứng tại các thời điểm sau gây viêm khớp cấp
Lô
Điểm đau khớp gối
Sau 3 giờ
Sau 27
giờ
Sau 51
giờ
Sau 75
giờ
Chứng (n=6) 0,6 ± 0,2 0,2 ± 0,1 0,1 ± 0,0 0,0 ± 0,0
Carrageenan
(n=6)
1,8 ± 0,2 1,9 ± 0,1 1,7 ± 0,2 1,6 ± 0,2
Ketoprofen (n=6) 1,7 ± 0,4 1,4 ± 0,2 1,2 ± 0,2 1,1 ± 0,19
Bảng 2. Điểm đau của các lô thử nghiệm trong 7
ngày điều trị (ngày 21-27) ở mô hình viêm khớp mạn
Lô chuột Điểm đau khớp gối
Ngày
19
Ngày
20
Ngày
21
Ngày
22
Ngày
23
Ngày
24
Ngày
25
Ngày
26
Chứng (n=8) 0,4 ±
0,2
0,3 ±
0,2
0,2 ±
0,1
0,2 ±
0,1
0,2 ±
0,1
0,2 ±
0,1
0,2 ±
0,1
0,1 ±
0,1
Carrageenan
(n=8)
1,8 ±
0,2
1,8 ±
0,2
1,6 ±
0,2
1,6 ±
0,2
1,4 ±
0,2
1,4 ±
0,2
1,2 ±
0,2
1,3 ±
0,2
Ketoprofen
(n=8)
1,6 ±
0,2
1,5 ±
0,2
1,6 ±
0,2
1,5 ±
0,2
1,5 ±
0,2
1,1 ±
0,2
1,1 ±
0,2
0,9 ±
0,2
Ở mô hình gây viêm khớp cấp: điểm đau
khớp gối chân chuột ở lô chứng cao nhất là 0,6
sau khi tiêm sau đó giảm về mức 0. Điểm đau
khớp gối chân chuột ở lô gây viêm
(carrageenan) cao nhất là 1,9 ± 0,2. Điểm đau
này chỉ giảm nhẹ trong quá trình thử nghiệm
và đến thời điểm 75 giờ sau khi tiêm là 1,6 ±
0,2. Mức độ giảm là 0,3 điểm. Ở lô điều trị
bằng ketopfofen mức độ đau cao nhất là 1,7 ±
0,4. Điểm đau này giảm trong quá trình thử
nghiệm. Đến thời điểm 75 giờ sau khi tiêm,
điểm đau là 1,1 ± 0,2. Mức độ giảm là 0,6 điểm.
Mặc dù không có sự khác biệt có ý nghĩa
thống kê giữa lô đối chiếu so với lô bệnh nhưng
có thể nhận thấy điểm đau của lô đối chiếu giảm
nhanh hơn so với lô bệnh, bắt đầu từ thời điểm
27 giờ cho đến kết thúc thử nghiệm.
Ở mô hình gây viêm khớp mạn: điểm đau
khớp gối chân chuột ở lô chứng cao nhất là 0,4
sau khi tiêm sau đó giảm về mức 0. Trong khi
đó ở lô gây viêm điểm đau trước khi điều trị là
1,8 ± 0,2. Điểm đau này giảm rất ít và đến
ngày 26 điểm đau của lô này là 1,3 ± 0,2. Mức
giảm về độ đau có chuyển biến nhưng không
đáng kể. Ở lô ketoprofen điểm đau ngày trước
khi điều trị là 1,6 ± 0,2 và có xu hướng giảm
xuống, đến cuối đợt điều trị điểm đau là 0,9 ±
0,2. Mức độ giảm là 0,7 điểm.
Phân tích vi thể
Ở lô chứng, sau khi tiêm NaCl 0,9%, vi thể
khớp và mô quanh khớp hầu như không có sự
thay đổi nào. Ở lô gây viêm bằng carrageenan,
có sự tăng sinh tế bào niêm mạc hoạt dịch với
sự xâm nhập của những tế bào viêm (hình 3,
phải-trên) và cả sự xâm nhập tế bào viêm vào
trong mô mỡ (hình 3, phải-dưới). Ở lô điều trị
bằng ketoprofen khu vực viêm khu trú hơn so
với lô gây viêm và có sự hình thành các tế bào
sợi (hình 4).
Hình 3. Hoạt dịch và mô mỡ ở khớp chân chuột nhóm chứng (NaCl 0,9%) và khớp chân chuột gây viêm
(carrageenan 2%) với sự tăng sinh và hiện diện của tế bào viêm
Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 Nghiên cứu Y học
Chuyên Đề Dược Học 451
Hình 4. Tăng sinh tế bào lớp hoạt dịch và thấu nhập tế bào viêm ở lô gây viêm (carrageenan); Sự hình thành tế
bào sợi và ít có tế bào viêm hơn khi được điều trị bằng ketoprofen.
KẾT LUẬN
Qua thực nghiệm mô phỏng mô hình gây
viêm khớp cấp và mạn tính trên chuột nhắt,
chúng tôi rút ra một số kết luận như sau:
- Trên mô hình gây viêm khớp cấp tính:
hỗn dịch carrageenan 2% làm sưng viêm
khớp gối, làm thay đổi hình ảnh vi thể khác
biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng. Mặc
dù điểm đau có gia tăng nhưng chưa đạt ý
nghĩa thống kê. Ketoprofen 2,5% có tác dụng
làm giảm mức độ sưng viêm và cải thiện tình
trạng viêm trên vi thể.
- Trên mô hình gây viêm khớp mạn tính:
tiêm cách quãng hỗn dịch carrageenan 2%
mỗi 3 ngày trong 19 ngày gây sưng viêm
khớp gối kéo dài. Sau khi ngưng tiêm tác
nhân gây viêm, tình trạng viêm khớp tiếp
tục được duy trì trên 7 ngày. Ketoprofen sử
dụng trong giai đoạn điều trị (từ ngày 20-27)
có tác dụng cải thiện tình trạng sưng viêm,
cấu trúc vi thể và mức độ đau trên mô hình
này.
- Với mức độ đáp ứng của cả 2 mô hình
khi điều trị bằng ketoprofen, chúng tôi cho
rằng cả 2 mô hình này đều có thể được ứng
dụng trong sàng lọc các thuốc có khả năng
điều trị, hỗ trợ điều trị viêm khớp.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Carara C (2004), ‘’Anti-inflammatory effect of mud-bath
applications on adjuvant arthritis in rats’’, Clinical and
Experimental Rheumatology, 22, 763-766.
2. Hansra P, et al (2000), ‘’Carrageenan-induced arthritis in the
rat’’, Inflammation, 24 (2), 141-155.
3. Hwang HJ, Lee HJ, Kim CJ, Shim I, Hahm DH. (2008),
‘’Inhibitory Effect of Amygdalin on Lipopolysaccharide-
Inducible TNF-α and IL-1β mRNA Expression and
Carrageenan-Induced Rat Arthritis’’, Journal of Microbiology and
Biotechnology, 18 (10), 1641-1647.
Ngày nhận bài báo : 14.12.2012
Ngày phản biện nhận xét bài báo : 21.12.2012
Ngày bài báo được đăng : 10.03.2014
Các file đính kèm theo tài liệu này:
- mo_phong_mo_hinh_gay_viem_khop_cap_va_man_tinh_bang_carragee.pdf