Nghiên cứu tác dụng kháng viêm và độc tính cấp của cao chiết cồn lá cây thóc lép (Desmodium Gangeticum)

1Nghiên cứu trao đổi ● Research-Exchange of opinionTạp chí Khoa học - Trường Đại học Mở Hà Nội 67 (5/2020) 1-9 NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM VÀ ĐỘC TÍNH CẤP CỦA CAO CHIẾT CỒN LÁ CÂY THÓC LÉP (DESMODIUM GANGETICUM) STUDY ON ANTI-INFLAMMATORY EFFECT AND ACUTE TOXICITY OF ETHANOL EXTRACT OF THE LEAVES OF DESMODIUM GANGETICUM (L.) DC. Cao Sơn Tùng*, Ngọ Thị Phương†, Phương Anh Tuấn†, Nguyễn Tuấn Anh*, Đỗ Thị Thảo‡, Trịnh Thị Thu Hằng§, Lê Minh Hà† Ngày tòa soạn nhận được bài báo: 4/11/2019 Ngày nhận kết quả phản biện đánh giá: 4/5/2020 Ngày bài báo được duyệt đăng: 27/5/2020 Tóm tắt: Kết quả nghiên cứu tác dụng kháng viêm cho thấy cao chiết cồn của lá cây Thóc lép (Desmodium gangeticum (L.) DC.) liều 100 mg/kgP thể hiện tác dụng chống viêm cấp mạnh và kéo dài hơn so với liều 300 mg/kg trên mô hình gây phù chân chuột thực nghiệm bằng carrageenin. Ở 2 liều nghiên cứu 100 và 300 mg/kgP mẫu nghiên cứu đều có tác dụng chống viêm mạn trên mô hình gây u hạt thực nghiệm. Kết quả nghiên cứu độc tính cấp cho thấy cao chiết cồn của lá cây Thóc lép không gây chết và không ảnh hưởng đến quá trình phát triển bình thường của động vật thí nghiệm với liều tối đa là 5.000 mg/kgP theo đường uống. Đây là lần đầu tiên hoạt tính kháng viêm in vivo và độc tính cấp của cây Thóc lép Việt Nam được nghiên cứu. Từ khóa: Thóc lép, Desmodium gangeticum, kháng viêm, độc tính cấp. Abstract: The results showed that the alcohol extract of the leaves of Desmodium gangeticum (L.) DC. at a dose of 100 mg/kgP showed a stronger and lasting acute anti- infl ammatory eff ect than a dose of 300 mg/kgP in carrageenan-induced paw edema. At studied doses of 100 and 300 mg/kgP, the sample has a chronic anti-infl ammatory eff ect on the experimental granulomatous model. The studied sample did not cause death and did not aff ect the normal development process of experimental animals with a maximum dose of 5000 mg/kgP orally. This is the fi rst time anti-infl ammatory eff ect and acute toxicity of Desmodium gangeticum were reported. Keywords: Desmodium gangeticum (L.) DC, anti-infl ammatory, acute toxicity. * Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội † Viện Hóa học các hợp chất thiên nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam (VAST) ‡ Viện Công nghệ Sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam (VAST) § Trường Đại học Mở Hà Nội 2 Nghiên cứu trao đổi ● Research-Exchange of opinion 1. Đặt vấn đề Cây Thóc Lép có tên khoa học là Desmodium gangeticum (L.) DC., thuộc họ Đậu (fabaceae). Là loài cây cổ nhiệt đới, mọc hoang ở vùng đồi núi, trên các bãi cỏ, ven đường đi từ Bắc tới Nam. Trong y học cổ truyền Việt Nam, y học cổ truyền các nước châu Á đặc biệt là Trung Quốc, các bộ phận của Thóc lép đc sử dụng như một phương thuốc để giải nhiệt, tiêu hóa, cầm máu, giảm đau, sát khuẩn, trị các bệnh viêm da, viêm da thần kinh, viêm ngực, trị sốt thương hàn, hen suyễn, viêm phế quản, dùng trong việc điều trị rắn cắn, chống nôn, ngộ độc và sỏi thận [1,2]. Các nghiên cứu về hóa học trên thế giới đã chỉ ra Thóc lép giàu các lớp chất fl avonoid, alkaloid, sterol và glycolipid [2]. Trong các nghiên cứu trước đây, chúng tôi đã phân lập và xác định cấu trúc của 10 hợp chất từ lá cây Thóc lép ở Việt Nam: (6S,9R)- roseoside, nicotifl orin, rutin, luteolin, luteolin tetramethyl ether, protocatechuic acid, N,N-dimethyltetradecan-1-amine, (+)-pinitol, stigmasterol và daucosterol [3,4]. Tuy nhiên cho tới nay, hầu như chưa thấy có nghiên cứu về hoạt tính sinh học của cây Thóc lép Việt Nam được công bố. Để tiếp nối các nghiên cứu trước đây và nhằm làm sáng tỏ tác dụng chữa bệnh của cây Thóc lép trong dân gian, trong bài báo này chúng tôi trình bày các kết quả nghiên cứu in vivo về tác dụng kháng viêm và độc tính cấp của cao chiết cồn của lá cây Thóc lép. 2. Thực nghiệm 2.1. Tạo cao chiết cồn 2,0 kg bột lá cây Thóc lép được chiết với cồn 96 độ, ở 50oC, 3 lần, mỗi lần 5 giờ. Dịch chiết được gom lại, lọc và cất loại dung môi dưới áp suất giảm thu được 85,0 g cao chiết cồn (ký hiệu là TL) được dùng cho các nghiên cứu về hoạt tính tiếp theo. 2.2. Nghiên cứu về hoạt tính kháng viêm của Thóc lép. 2.1.1. Động vật thí nghiệm - Chuột cống trắng, cả 2 giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 150 ± 20 gam (để nghiên cứu tác dụng chống viêm), đạt tiêu chuẩn thí nghiệm do Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp. - Động vật được nuôi trong điều kiện đầy đủ thức ăn và nước uống tại phòng thí nghiệm từ 3 - 5 ngày trước khi nghiên cứu và trong suốt thời gian nghiên cứu. 2.1.2. Phương pháp nghiên cứu 2.1.2.1. Tác dụng kháng viêm cấp theo đường uống Chuột cống trắng, cả 2 giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 150 ± 20 gam. Được tiến hành trên mô hình gây phù chân chuột bằng carrageenin theo phương pháp Winter. Chuột cống trắng được chia ngẫu nhiên thành 4 lô, mỗi lô 10 con. Lô 1 (lô chứng sinh học): uống nước cất 1,0ml/100g. Lô 2 (lô chứng dương): uống aspirin 150 mg/kg/ngày. Lô 3 (lô TL liều thấp): uống TL 100 mg/kg/ngày. Lô 4 (lô TL liều cao): uống TL 300 mg/kg/ngày (các thuốc chuẩn hoặc thuốc thử được pha trong nước cất, cho chuột uống với lượng 1,0 ml/100g ). Chuột được gây viêm bằng cách tiêm carrageenin 1% (pha trong nước muối sinh lý) 0,05 ml/chuột vào gan bàn chân sau, bên phải của chuột. Đo thể tích chân chuột (đến khớp cổ chân) bằng dụng cụ chuyên biệt (Plethysmometer) vào các thời điểm: trước khi gây viêm (V 0 ), sau khi gây viêm 2 giờ (V 1 ), 4 giờ (V 2 ), 6 giờ (V 3 ) và 24 giờ (V t ) để đánh giá tác dụng chống viêm của thuốc. 3Nghiên cứu trao đổi ● Research-Exchange of opinion Kết quả được tính theo công thức của Fontaine. - Độ tăng thể tích chân của từng chuột được tính theo công thức: ΔV% = 100x (V t -V 0 )/V x Trong đó: V%: độ tăng thể tích chân chuột. V 0 : thể tích chân chuột trước khi gây viêm. V t : thể tích chân chuột sau khi gây viêm. - Tác dụng chống viêm của thuốc được đánh giá bằng khả năng ức chế phản ứng phù (I%). Trong đó: I%: khả năng ức chế phản ứng phù (%). : trung bình độ tăng thể tích chân chuột ở lô chứng (%). : trung bình độ tăng thể tích chân chuột ở lô uống thuốc (%). 2.1.2.2. Tác dụng chống viêm mạn tính Được tiến hành trên mô hình gây u hạt thực nghiệm bằng amiant. Gây u hạt thực nghiệm theo phương pháp của Ducrot, Julou và cộng sự trên chuột cống trắng. Amiant được viên thành hạt hình cầu nhỏ trọng lượng 30,0 ± 1,0 mg, tiệt khuẩn bằng nhiệt độ cao (160oC / 2 giờ) trước khi cấy vào cơ thể chuột cống. Chuột cống trắng được chia ngẫu nhiên làm 4 lô, mỗi lô 8 con. Lô 1 (lô chứng sinh học): uống nước cất. Lô 2 (lô chứng dương): uống prednisolon 5,0 mg/kg/ngày. Lô 3 (lô TL liều thấp): uống TL 100 mg/kg/ngày. Lô 4(lô TL liều cao): uống TL 300 mg/kg/ngày. Gây viêm mạn cho chuột bằng cách cấy vào dưới da gáy của chuột viên amiant đã nhúng vào carrageenin 1%. Sau khi cấy amiant, chuột được uống thuốc trong 5 ngày liền. Ngày thứ 6, gây mê chuột bằng ether, bóc tách khối u hạt, sấy ở nhiệt độ 56oC/18 giờ. So sánh trọng lượng trung bình của khối u hạt (đã trừ trọng lượng amiant) giữa các lô uống thuốc và lô chứng. Tác dụng chống viêm được biểu thị bằng tỉ lệ % giảm trọng lượng khối u. 2.1.3. Phương pháp xử lý số liệu Cá c số liệu được xử lý trên Excel, thuật toán thống kê student t’test, F’test và phương pháp phân tích phương sai một nhân tố ngẫu nhiên (one way ANOVA) để kiểm tra sự sai khác có ý nghĩa so với đối chứng âm, với p < 0.05 được coi là sai khác có ý nghĩa. 2.2. Thử nghiệm hoạt tính gây độc tính cấp trên chuột 2.2.1. Động vật thí nghiệm - Chuột nhắt trắng thuần chủng dòng BALB/c với tổng số lượng chuột được thí nghiêm là 42 con mỗi con có cân nặng 20 ± 2g. - Động vật thí nghiệm được nuôi ở phòng Thử nghiệm sinh học, Viện Công nghệ sinh học, nuôi trong điều kiện chuồng thoáng mát, đảm bảo vệ sinh, chế độ ăn uống theo nhu cầu của chuột. Tất cả động vật thí nghiệm trước khi tiến hành đều được xác định cân nặng. 2.2.2. Phương pháp nghiên cứu Nguyên tắc: Cho chuột thử nghiệm uống cùng liều mẫu nghiên cứu trong điều kiện ổn định như nhau, quan sát các phản ứng xảy ra trong 72h. 4 Nghiên cứu trao đổi ● Research-Exchange of opinion 2.2.2.1 Thử sơ bộ - Cho 6 chuột (50% đực, 50% cái) nhịn đói ít nhất 12 giờ trước khi cho uống mẫu nghiên cứu ở liều duy nhất, tối đa có thể, qua đường uống (thể tích tối đa là 0,2 ml-0,75 ml/10g trọng lượng chuột-theo “Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng và lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu” của Bộ y tế ban hành theo quyết định số 141/QĐ-K2ĐT ngày 27/10/2015) [5]. Theo dõi và ghi nhận cử động tổng quát, biểu hiện về hành vi, trạng thái lông, ăn uống, tiêu tiểu và số lượng chết của chuột trong vòng 72 giờ, chuột không có dấu hiệu bất thường hoặc chết, tiếp tục theo dõi trong 14 ngày. - Các h xử lí và chuẩn bị mẫu thử: Mẫu ở dạng cao tan kém trong nước mà tan trong cồn nên được pha trong cồn, sau đó giảm nồng độ cồn và cho chuột uống liều tối đa 5000 mg/kg trọng lượng chuột. - Kết quả thử nghiệm sơ bộ cho thấy có không có chuột bị chết trong vòng 72 h. Như vậy, thí nghiệm được tiếp tục thực hiện theo Trường hợp 1. 2.2.2.2. Thử nghiệm chính thức Có 3 trường hợp có thể xảy ra: - Trường hợp 1: Sau khi cho chuột uống mẫu, số chuột trong lô thử vẫn bảo toàn cho thấy liều cao nhất có thể qua kim mà không làm chuột chết. Liều này được kí hiệu là Dmax và liều tương đối an toàn Ds dùng trong các thử nghiệm dược lý có thể bằng hoặc lớn hơn 1/5 Dmax. - Trường hợp 2: Sau khi cho chuột uống mẫu nghiên cứu, tỉ lệ tử vong là 100% thì thử với liều giảm ½ so với liều đầu. Tiếp tục thăm dò cho đến khi tìm được liều tối thiểu gây chết 100% chuột (LD 100 ) và liều tối đa không gây chết con nào (LD 0 ). Tiến hành thử nghiệm xác định LD 50 theo phương pháp củ a Dodehe Yeo và cộng sự (2012) [6], N’dia Kouadio Frédéri và cộ ng sự (2013) [7], Aristide Traore và cộ ng sự (2014) [8]. - Trường hợp 3: Sau khi uống mẫu thử, số chuột tử vong thấp hơn 100%, không xác định được liều gây chết tuyệt đối (LD 100 ) dẫn tới không thể xác định được LD 50 . Tuy nhiên, trường hợp này có thể xác định được liều tối đa không gây chết chuột, gọi là liều dưới liều chết (LD 0 ). Khi đó liều tương đối an toàn Ds dùng trong các thử nghiệm dược lý có giá trị bằng 1/5 hoặc 1/10 liều LD 0 . Thực nghiệm được tiến hành như sau: 36 chuột nhắt trắng dòng BALB/c khoẻ mạnh, khối lượng khoảng 19-21 gram, không phân biệt giống, được nuôi tại khu nuôi động vật của Viện Công nghệ sinh học trong điều kiện tiêu chuẩn về nhiệt độ, ánh sáng, được chia làm 6 lô (6 chuột/lô), và bị bỏ đói hoàn toàn 16 giờ trước khi được uống chế phẩm GX. Chuột được theo dõi cân nặng và biểu hiện sinh lý trong khoảng thời gian 2 giờ sau khi uống và ở các thời điểm trước khi uống mẫu, ngày 1, ngày 4 và ngày 7. Các số liệu được xử lí trên Excel, được trình bày dạng Mean ± SE. - Lô 1: (đối chứng sinh lý) Uống cồn thực phẩm pha ở 10% liều 0,3- 0,4 ml/con - Lô 2: Uống TL liều 1000mg/kg trọng lượng cơ thể - Lô 3: Uống TL liều 2000 mg/kg trọng lượng cơ thể - Lô 4: Uống TL liều 3000 mg/kg trọng lượng cơ thể - Lô 5: Uống TL liều 4000 mg/kg 5Nghiên cứu trao đổi ● Research-Exchange of opinion trọng lượng cơ thể - Lô 6: Uống TL liều 5000 mg/kg trọng lượng cơ thể Công thức tính giá trị LD 50 Xác định LD 50 được tiến hành theo phương pháp của Karber Behrens [6,9] (trích theo Dodehe Yeo và cs, 2012 và trích theo Shetty Akhila J và cs, 2007) như sau: LD 50 = LD 100 - Σa×b/N Trong đó: LD 50 : Liều chết 50% động vật thí nghiệm. LD 100 : Liều thấp nhất gây chết 100% động vật thí nghiệm. N: Số động vật trong một nhóm. a: Sự khác biệt về liều giữa hai liều liên tiếp. b: Tỷ lệ tử vong trung bình của hai nhóm liên tiếp. 3. Kết quả nghiên cứu 3.1. Tác dụng kháng viêm của cao chiết Thóc lép 3.1.1. Tác dụng chống viêm cấp tính Tác dụng chống viêm cấp tính của cao chiết Thóc lép được đánh giá thông qua việc gây phù chân chuột bằng carrageenin 1% theo phương pháp Winter và được theo dõi tại lần lượt các thời điểm trước khí gây viêm và sau khi gây viêm 2, 4, 6 và 24h. Tại các mốc thời gian tương ứng, sử dụng cao chiết Thóc lép để đánh giá khả năng gây ức chế viêm với liều lượng 100mg/kg/ngày/chuột và 300mg/kg/ngày/chuột. Kết quả được trình bày ở bảng 1. Bảng 1. Độ tăng thể tích chân chuột sau khi gây viêm Lô nghiên cứu n Độ tăng thể tích chân chuột (ΔV%) ( ± SE) Lô 2 (Aspirin 150 mg/kg) 8 19,18 ± 2,40 47,11 ± 4,28 41,29 ± 4,34 6,45 ± 3,81 Lô 3 (TL 100 mg/kg) 8 39,61 ± 7,14 35,56 ± 4,00 21,84 ± 6,02 9,47 ± 0,28 Lô 4 (TL 300 mg/kg) 9 34,54 ± 4,84 61,08 ± 6,00 42,75 ± 5,73 9,56 ± 1,96 Bảng 2. Mức độ ức chế phản ứng phù chân chuột của mẫu thử TL Lô nghiên cứu n Mức độ ức chế phản ứng phù (I %) so với lô chứng Sau 2 giờ Sau 4 giờ Sau 6 giờ Sau 24 giờ Lô 2 (aspirin 150 mg/kg) 8 58,35 41,04 23,57 19,57 Lô 3 (TL 100 mg/kg) 8 13,98 55,49 59,58 - 18,10 Lô 4 (TL 300 mg/kg) 9 24,99 23,54 20,87 - 19,33 6 Nghiên cứu trao đổi ● Research-Exchange of opinion Nhận xét Tại thời điểm 2 giờ sau khi gây viêm, lô uống aspirin thể hiện tác dụng rõ nhất (ức chế được 58,35% phản ứng phù viêm). Hai lô uống TL có xu hướng làm giảm mức độ tăng thể tích chân chuột, nhưng sự khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê so với lô chứng. Tại thời điểm 2 giờ sau gây viêm cấp bằng carrageenin, độ tăng thể tích chân chuột chưa có sự khác biệt rõ rệt so với lô chứng sinh học (p > 0,05). Tại thời điểm 4 giờ sau gây viêm, độ tăng thể tích chân chuột ở cả 2 lô uống TL đã giảm rõ rệt so với lô chứng sinh học với mức độ ức chế phản ứng phù là 55,49% ở lô uống TL 100 mg/kg (p < 0,05) và 23,54% ở lô uống TL liều 300 mg/kg (p < 0,001) g. Tại thời điểm 6 giờ sau gây viêm, chỉ có lô TL liều thấp (100 mg/kg) còn tác dụng chống viêm với mức độ ức chế phản ứng phù là 59,58% (p < 0,01), cao hơn lô uống aspirin. Như vậy, TL liều 100 mg/kg có tác dụng chống viêm mạnh hơn và kéo dài hơn so với TL liều 300 mg/kg. Aspirin thể hiện tác dụng chống viêm mạnh nhất tại thời điểm 2 giờ sau khi gây viêm, phù hợp với đặc điểm dược động học và tác dụng của aspirin. Mức độ ức chế phản ứng phù tại thời điểm 2 giờ là 58,35%, cao hơn cả 4 lô uống thuốc thử TL. Sau đó, mức độ ức chế phản ứng phù của aspirin giảm dần ở các thời điểm sau. Tại thời điểm 24 giờ sau khi gây viêm, không có sự khác biệt về độ tăng thể tích chân chuột giữa tất cả các lô nghiên cứu (p > 0,05). Kết quả nghiên cứu cho thấy tác dụng chống viêm cấp của cao chiết TL trên mô hình gây phù chân chuột thực nghiệm bằng carrageenin. 3.1.2. Tác dụng chống viêm mãn tính Trên mô hình gây viêm mạn thực nghiệm bằng cấy amiant, xác định trọng lượng khối u hạt của các lô chứng và các lô uống thuốc, kết quả thu được như sau: Bảng 3. Trọng lượng trung bình u hạt thực nghiệm Lô nghiên cứu n Trọng lượng u hạt (mg) ( X ± SE) Tỉ lệ giảm trọng lượng u hạt (%) p so với lô 1 Lô 1 (chứng sinh học) 8 89,4 ± 11,2 Lô 2 (Prednisolon 5 mg/kg) 8 50,9 ± 4,4 75,68 < 0,05 Lô 3 (TL 100 mg/kg) 8 56,5 ± 4,3 58,19 < 0,05 Lô 4 (TL 300 mg/kg) 8 55,8 ± 4,9 60,31 < 0,05 Nhận xét Kết quả ở bảng trên cho thấy: Trọng lượng u hạt ở 4 lô uống thuốc thử và lô uống prednisolon đều giảm rõ rệt so với lô chứng sinh học (p < 0,05 và p < 0,01). Không có sự khác biệt rõ rệt về trọng lượng u hạt giữa các lô uống thuốc thử và prednisolon. Thí nghiệm này nhằm đánh giá tác dụng chống viêm mạn của thuốc thử thông qua khả năng làm giảm quá trình tăng sinh tổ chức, giảm khối lượng u hạt tạo thành khi cấy amiant đã nhúng carragenin vào dưới da chuột. Amiant là một vật lạ không có khả năng tiêu khi đưa vào cơ thể. Carrageenin có bản chất là polysaccharid, có khả năng kích thích quá trình viêm. Cấy 7Nghiên cứu trao đổi ● Research-Exchange of opinion amiant đã nhúng carragenin vào dưới da chuột sẽ kích thích quá trình viêm mạnh hơn chỉ cấy amiant đơn thuần. Khi đó cơ thể sẽ phản ứng viêm bằng cách tập trung nhiều tế bào, tạo ra mô bào lưới, nguyên bào sợi bao quanh vật lạ, tạo nên hình ảnh u hạt của mô hình viêm gan thực nghiệm. Thuốc có tác dụng chống viêm mạn sẽ ức chế sự tạo thành u hạt, làm giảm khối lượng u hạt tạo thành so với nhóm chứng không dùng thuốc. Thông qua việc so sánh trọng lượng u hạt giữa các lô uống thuốc thử và lô đối chứng, có thể đánh giá được thuốc có tác dụng chống viêm mạn trên thực nghiệm hay không. Kết quả ở bảng 3 cho thấy các lô uống TL (liều 100 mg/kg và liều 300 mg/ kg) đều có tác dụng ức chế sự tạo thành u hạt sau khi gây viêm rõ rệt so với lô chứng sinh học (p < 0,05 và p < 0,01), với tỉ lệ giảm trọng lượng u hạt ở lô uống TL thứ tự là 36,80% và 37,58%, ở lô uống prednisolon là 43,06 %. Không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giữa trọng lượng u hạt của các lô uống thuốc thử so với nhau và so với lô uống prednisolon (p > 0,05). Kết quả nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn của mẫu thử TL cho thấy mẫu thuốc thử với 2 liều đã dùng đều có tác dụng chống viêm mạn trên mô hình gây u hạt thực nghiệm. 3.2. Kết quả thử nghiệm độc tính cấp của cao chiết Thóc lép Với sự bố trí thí nghiệm ở trên chúng tôi thu được kết quả độc tính cấp theo đường uống của mẫu nghiên cứu như sau: Bảng 4. Số lượng chuột chết, biểu hiện bên ngoài của chuột khi uống mẫu thử TL Lô Mẫu TL (mg/ kg) số chuột chết trong 72 giờ Biểu hiện bên ngoài trong vòng 0-72 giờ 1 Đối chứng 0 Sau khi uống nước chuột di chuyển và ăn uống bình thường, phản xạ ánh sáng và âm thanh tốt 2 1000 0 Sau khi uống mẫu thử TL chuột di chuyển và ăn uống bình thường, phản xạ ánh sáng và âm thanh tốt 3 2000 0 Sau khi uống mẫu thử TL chuột di chuyển và ăn uống bình thường, phản xạ ánh sáng và âm thanh tốt 4 3000 0 Sau khi uống mẫu thử TL chuột di chuyển và ăn uống bình thường, phản xạ ánh sáng và âm thanh tốt 5 4000 0 Sau khi uống mẫu thử TL chuột di chuyển và ăn uống bình thường, phản xạ ánh sáng và âm thanh tốt 6 5000 0 Sau khi uống mẫu thử TL chuột di chuyển và ăn uống bình thường, phản xạ ánh sáng và âm thanh tốt Kết quả thí nghiệm trên cho thấy: mẫu TL không gây chết động vật thí nghiệm theo đường uống trong thí nghiệm này với liều tối đa là 5000 mg/kg. Theo dõi khối lượng cơ thể chuột Kết quả theo dõi khối lượng cơ thể chuột ở nhóm chứng và nhóm thử được thể hiện trong các bảng 5. Kết quả theo dõi khối lượng trung bình của chuột trong quá trình thử nghiệm 7 ngày cho thấy: - Trước khi uống mẫu thử: Khối lượng trung bình của chuột ở các nhóm thử trước khi đưa vào thử nghiệm không có sự khác biệt so với nhóm chứng (P>0,05). 8 Nghiên cứu trao đổi ● Research-Exchange of opinion Bảng 5. Kết quả theo dõi khối lượng của chuột ở các lô Lô (mg/kg) Khối lượng trung bình của chuột thí nghiệm Trước khi uống ngày 1 ngày 4 ngày 7 ĐC 20,63± 0,27 20,67 ± 0,39 21,87 ± 0,32 22,95 ± 0,26 1000 20,71 ± 0,30 20,70 ± 0,27 21,93 ± 0,41 23,05 ± 0,26 2000 20,48 ± 0,25 20,51 ± 0,32 21,63 ± 0,38 21,76 ± 0,30 3000 20,62 ± 0,31 20,63 ± 0,26 22,63 ± 0,33 22,78 ± 0,28 4000 20,47 ± 0,28 20,50 ± 0,35 21,56 ± 0,24 22,49 ± 0,33 5000 20,57 ± 0,34 20,54 ± 0,32 21,53 ± 0,30 22,52 ± 0,42 P >0,05 >0,05 >0,05 >0,05 Ghi chú: * P<0,05 là có sự sai khác thống kê so với lô đối chứng - Sau khi uống mẫu thử 1 ngày, 4 ngày và 7 ngày: Chuột thí nghiệm ở nhóm chứng và nhóm thử không có sự khác biệt (P>0,05). Kết quả thu được chứng tỏ mẫu nghiên cứu không ảnh hưởng đến quá trình phát triển bình thường của chuột thí nghiệm. Tiêu thụ thức ăn và nước uống của chuột - Nhóm chứng: Hoạt động và ăn uống bình thường. - Các nhóm thử: theo dõi trong 7 ngày thửtất cả các con chuột đều ăn uống bình thường so với nhóm chứng. Quan sát dấu hiệu ngộ độc - Sau khi uống mẫu thử TL không thấy có chuột chết ở tất cả các lô thử nghiệm và lô đối chứng. Theo phân loại chất độc theo đường uống của tổ chức WHO (WorldHealth Organization, 1993), Tổ chức Hợp tác và Phát triển kinh tế thế giới (Organization for Economic Cooperation and Development - OECD), và GHS (Globally Harmonized System of Classifi cation and Labelling of Chemicals) [10] các mẫu thử nghiệm không gây độc ở liều tối đa, không xác định được giá trị LD50 hoặc có giá trị LD50 > 5000 mg/kg thể trọng theo đường uống thì được coi là không độc hoặc không phân loại (unclassifi ed). Dựa trên kết quả thu được của thử nghiệm này có thể kết luận mẫu thử TL trong thí nghiệm này thuộc nhóm không gây độc theo đường uống. 4. Kết luận Cặn chiết ethanol của lá cây Thóc lép (ký hiệu mẫu là TL) liều 100 mg/ kg có tác dụng chống viêm cấp mạnh hơn và kéo dài hơn so với TL liều 300 mg/kg trên mô hình gây phù chân chuột thực nghiệm bằng carrageenin. Kết quả nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn của mẫu thử TL cho thấy mẫu thuốc thử với 2 liều đã dùng đều có tác dụng chống viêm mạn trên mô hình gây u hạt thực nghiệm. Mẫu TL không gây độc theo đường uống với liều tối đa là 5000 mg/kg và không ảnh hưởng đến quá trình phát triển bình thường của chuột thí nghiệm. Các kết quả đạt được là cơ sở khoa học cho việc có thể sử dụng cao chiết cồn của lá cây Thóc lép để điều trị các bệnh liên quan tới viêm nhiễm. Đây là lần đầu tiên hoạt tính kháng viêm in vivo và độc tính cấp của cây Thóc lép Việt Nam được công bố. 9Nghiên cứu trao đổi ● Research-Exchange of opinion Lời cảm ơn: Công trình được hoàn thành với sự tài trợ kinh phí của Quỹ phát triển khoa học và công nghệ quốc gia NAFOSTED, mã số đề tài 106-YS.05- 2016.02 và Chương trình hỗ trợ Nghiên cứu viên cao cấp, mã số NVCC07.04/20-20. Tài liệu tham khảo: [1]. Đỗ Tất Lợi, Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, 2006, trang 144-145. [2]. Subha R. Et al., Review: An ethnomedicinal, phytochemical and pharmacological profi le of Desmodium gangeticum (L.) DC. and Desmodium adscendens (Sw.) DC., 1011, Journal of Ethnopharmacology 136 page 283- 296. [3]. Le Minh Ha et al., A contribution on study chemical constituents of Desmodium gangeticm of Vietnam, 2019, Vietnam Journal of Science and Technology 57 page 1-6. [4]. Le Minh Ha et al., Some glycosides isolated from Desmodium gangeticum (L.) DC. of Vietnam, 2018, Vietnam Journal of Science and Technology 56 page 99-103. [5]. “Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng và lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu” của Bộ y tế ban hành theo quyết định số 141/ QĐ-K2ĐT ngày 27 tháng 10 năm 2015. [6]. Yeo D, Rita Bouagnon, Bernard Nazaire Djyh, Chonta Tuo and Jean David N’guessan (2012) Acute and subacute toxic study of aqueous leaf extract of combretum molle. Tropical Journal of Pharmaceutical Research April, 11(2): 217-223. [ 7]. Frédéri NK, Bléyéré Nahounou Mathieu, Kouakou Kouakou Léandr1, Abo Kouakou Jean Claude, Yapo Angoué Paul, Ehilé Ehouan Etienne (2013) Acute Toxicity in Mice and Eff ects of a Butanol Extract from the Leaves of Blighia Unijugata Bak (Sapindaceae) on Electrocardiogram of Rabbits. Sch Acad J Pharm, 2(6):429-435. [8]. Traore A, Sylvin Ouedraogo, Adama Kabore, Hamidou H Tamboura and I Pierre Guissou (2014) The acute toxicity in mice and the in vitro anthelminthic eff ects on Haemonchus contortus of the extracts from three plants (Cassia ieberiana, Guiera senegalensis and Sapium grahamii) used in traditional medicine in Burkina Faso. Annals of Biological Research, 5 (2):41-46 [9]. Akhila JS, Deepa S, Alwar MC (2007) Acute toxicity studies and determination of median lethal dose. Curr Sci, 93: 917-920. [10]. OECD (Organization for Economic Cooperation and Development) (2008). OECD guidelines for testing of chemicals. Section 4, health eff ects: Test No. 425: Acute oral toxicity: Up-and-down procedure. Retrieved from org/oecd/index.asp?lang=en (s) Địa chỉ: Viện Hóa học các hợp chất thiên nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam (VAST) Email: halm2vn@gmail.com