Xác định đồng thời một số dạng của vitamin nhóm B trong sản phẩm dinh dưỡng bằng kỹ thuạt sắc ký lỏng khối phổ sau thủy phân enzyme

(Bản scan) Khao sãt quy trĩnh chĩẽt mâu Trong nền mầu thực phàm nói chung và sàn phàm dinh dường nói riêng, các vitamin tồn tại ớ cà dạng tự do và các dạng liên kết phức tạp. Việc sử dụng phương pháp enzyme đề phân cắt các liên kết trong cấu trúc của các vitamin được ưu tiên lựa chọn. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đà sư dụng hồn hợp 3 loại enzyme (enzyme amylase bền nhiệt thủy phân tinh bột và đường, enzyme pro¬tease thúy phàn protein và enzyme phosphatase đè thủy phân các liên kết phosphat). Kết quà kháo sát ãnh hường cùa nồng độ dung dịch đệm trong khoang 5-100 mM đến khả năng hoạt động cùa enzyme được thể hiện trong hình 1. Khi thay đối nồng độ dung dịch amoni format, lượng chất phân tích thu được tãng dàn và cao nhất tại nồng độ 50 mM. Tuy nhiên, khi nồng độ đệm tăng đen 100 mM, lượng chất phân tích thu được giám xuống có thề do sự canh tranh ion. Do đó, nồng dộ đệm amoni format 50 mM được lựa chọn tối ưu. Nhiệt độ có ảnh hường tới hoạt độ cua enzyme, khi nhiệt dộ cao hơn nhiệt dộ tối ưu, tốc độ phàn ứng giam nhanh, trung tâm hoạt động mất đi cấu hình chuẩn và không còn phủ hợp được với cơ chất, do đó làm mất vai trò xúc tác cùa enzyme. Neu nhiệt độ thắp, toe độ phàn ứng chậm, hiệu quá thủy phân thấp. Tham khào một số tài liệu [1], [2], [6], [7], tiến hành khảo sát nhiệt độ thủy phân tại các mức: 35°c, 37°c, 40°C, 45°c, 50°C cho thấy: Lượng chất phân tích thu được tang lền khi nhiệt độ từ 35 đến 37°c và thay đòi không đáng kê khi nhiệt độ thủy phàn tâng 40°C. Tuy nhiên, nếu tiếp tục lăng nhiệt độ thúy phân dền 45-50°C, thi lượng chất phân tích thu được giàm xuống. Vi vậy nhiệt độ 37°c được lựa chọn do hàm lượng các chất phân tích thu được cao nhất. Đây cũng là nhiệt độ tối ưu để enzyme hoạt dộng xúc tác cho quá trình thủy phân mầu.