Bài giảng Huyết thanh học

HUYẾT THANH HỌC I. PHẢN ỨNG VI NGƢNG KẾT (MICROSCOPIC AGGLUTINATION TEST- MAT) - Phản ứng phát hiện kháng thể kháng Leptospira từ động vật nhiễm bệnh. - Thời điểm lấy mẫu để chuẩn đoán bằng phản ứng MAT - Diễn tiến của bệnh gồm 02 pha: Pha Lepto huyết & Lepto niệu T NGHIỆM ĐỊNH TÍNH Chuẩn bị kháng nguyên chuẩn Kieåm tra khaùng nguyeân tröôùc khi laøm phaûn öùng MAT (1) Nhoû moät gioït moãi oáng khaùng nguyeân (pha loaõng theo tyû leä 1:2 vôùi dung dòch ñeäm PPS) leân lame kính (2) Kieåm tra döôùi kính hieån vi neàn ñen (3) Khaùng nguyeân ñaït yeâu caàu khi - Di ñoäng toát - Nồng độ phù hợp - Khoâng töï ngöng keát Cách tiến hành - Phaûn öùng MAT laø phaûn öùng giöõa khaùng nguyeân soáng Leptospira chuẩn vôùi khaùng theå trong huyeát thanh XÉT NGHIỆM ĐỊNH TÍNH  - Pha loaõng huyeát thanh (1/50): Cho 100 μl huyeát thanh vaø 4,9 ml dung dòch PBS & trộn ñeàu. - Nhoû laàn löôït 50 μl khaùng nguyeân từ gieáng 1 - 23. -Nhỏ 50 μl huyeát thanh ñaõ pha loaõng vào mỗi giếng. - UÛ nhiệt độ phòng 28C trong 2 giôø. -Nhoû leân lame kính 10 μl töø moãi gieáng vaø ñoïc keát quaû ngöng keát treân kính hieån vi neàn ñen. ➱ Như vậy, độ pha loãng huyết thanh trong giếng 1 sẽ là 1/100 Đánh giá kết quả ++++: Taát caû Leptospira treân vi tröôøng ngöng keát thaønh cuïm maïng nheän hoaëc cuïm troøn, khoâng coøn xoaén khuaån töï do (1) +++: Treân 75% xoaén khuaån ngöng keát thaønh cuïm maïng nheän hoaëc cuïm troøn (2) ++: 50% ñeán 70% xoaén khuaån ngöng keát (3) +: 25% ñeán 50% xoaén khuaån ngöng keát (4) - Theo qui ñònh cuûa OIE (2000) maãu ñöôïc xem laø döông tính khi ngöng keát töø möùc ++ trôû leân (> 50% xoắn khuẩn ngưng kết) vaø ñoä pha loaõng huyeát thanh laø  1/100. XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƢỢNG (xác định hiệu giá kháng thể) Sau khi coù keát quaû phaûn öùng MAT ñònh tính, maãu huyeát thanh döông tính với serovar nào seõ tieán haønh ñònh löôïng hiệu giá kháng thể vôùi serovar đó Caùch tieán haønh phaûn öùng MAT xác định hiệu giá kháng thể: - Pha loaõng huyeát thanh caàn ñònh löôïng vôùi dung dòch ñeäm töø ñoä loaõng 1/100, 1/200, 1/400,, 1/3200 - Thực hiện phản ứng tƣơng tự nhƣ xét nghiệm định tính - Hieäu giaù ngöng keát ñöôïc xaùc ñònh ôû ñoä pha loaõng huyeát thanh cao nhaát coøn cho ngöng keát vôùi 50% khaùng nguyeân (möùc 2+). Chú ý - Nếu cần xác định tình trạng bệnh, lấy máu lại lần 2 (trên những thú đương tính lần 1) từ 2 – 4 tuần sau khi lấy máu xét nghiệm lần một. Nếu hiệu kháng thể lần xét nghiệm 2 gấp 4 lần hiệu giá lần 1 và trong đàn có 01 con xuất hiện triệu chứng bệnh điển hình  Trại đang có dịch bệnh này (bệnh đang tiến triển). - Tỷ lệ lấy mẫu 10% trên đàn lớn (phục vụ điều tra dịch tễ học) - Tỷ lệ lấy mẫu 10 cá thể trên đàn nhỏ Xác định kích thước của virus Newcastle Tác động của chloroform phá hủy vỏ bọc của virus Newcastle TIÊM TRỨNG GIỚI THIỆU 03 ĐƢỜNG TIÊM CƠ BẢN 1) TIÊM XOANG NIỆU MÔ (Allantois) - Chuẩn bị trứng: soi trứng, đánh dấu vị trí đầu phôi - Đường tiêm ngược lại với vị trí đầu phôi - Liều tiêm 0,1 - 0,2ml/trứng - Dùng paraffin bịt lỗ, hoặc dùng băng keo trong  Ấp trứng 37C - 24 giờ soi trứng lần đầu, phôi chết  loại bỏ trứng này (do tạp trùng). Tuy nhiên lƣu ý influenza virus có thể gây chết phôi 18 giờ sau khi tiêm. - Kiểm tra phôi chết do vi trùng hay virus + Nước xoang niệu mô trong: phôi chết do virus + Nước đục: do vi trùng - Newcastle virus cường độc gây chết phôi < 60 giờ - Sau khi chết, bỏ trứng vào tủ lạnh ít nhất 06 giờ cho mạch máu khô, rồi thu họach trứng 2) TIÊM MÀNG CAM (KỸ THUẬT TẠO BUỒNG HƠI GIẢ) - Virus đậu - Chuẩn bị trứng có tuổi phôi 9 – 11 ngày - Dùng bóp cao su hút khí từ lỗ 1 ra ngoài - Soi trứng lại, đánh dấu buồng hơi giả - Đục trứng qua vỏ cứng và vỏ lụa, tránh đục thủng màng cam (nếu thủng nước trứng sẽ chảy ra ngoài) - Liều tiêm 0,1-0,2ml/trứng, đặt trứng nằm ngang đem ấp - Bệnh tích gây thủy thủng, dày lên, nốt pock trên màng cam, không làm chết phôi 3) TIÊM TÚI LÒNG ĐỎ - Tuổi phôi 4-6 ngày hoặc 6-7 ngày - Để trứng nghiêng 30-45, tránh tiêm vào phôi Thu hoạch nước trứng đối với AI THANK YOU