Kết quả giám định và một số đặc điểm của nấm fusarium fujikuroi nirenberg gây bệnh vàng lá thối rễ cây ba kích (morinda officinalis how) tại Quảng Ninh

BVTV - Sè 5/2018 Kết quả nghiên cứu khoa học 68 8. Pissawan Chiemsombat et al., 2014. Occurrence of Telosma mosaic virus causing passion fruit severe mosaic disease in Thailand and immunostrip test for rapid virus detection. Crop Protection 63 (2014). 9. Revill, P. A., Ha, C. V., Lines, R. E., Bell, K. E., Vu, M. T., & Dale, J. L., 2004. PCR and ELISA-based virus surveys of banana, papaya and cucurbit crops in Viet Nam. Asia Pacific Journal of Molecular Biology & Biotechnology, 12(1 & 2), 27-32. Phản biện: TS. Trịnh Xuân Hoạt KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH VÀ MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM CỦA NẤM Fusarium fujikuroi Nirenberg GÂY BỆNH VÀNG LÁ THỐI RỄ CÂY BA KÍCH (Morinda officinalis How.) TẠI QUẢNG NINH Identification and Biological Characteristics of Fusarium fujikuroi Causal Agent of Root Rot Disease of Medicinal Indian Mulberry (Morinda officinalis How.) in Quang Ninh Province Ngô Quang Huy 1 , Mai Văn Quân 1 , Lê Quang Mẫn 1 , Lê Xuân Vị 1 , Lê Đức Trung 1 , Dƣơng Thị Nguyên 2 và Trịnh Xuân Hoạt 1 Ngày nhận bài: 05.08.2018 Ngày chấp nhận: 28.09.2018 Abstract Root rot is the most serious threatening disease affecting Indian mulberry (Morinda officinalis How.) (locally called as “Ba kich”) in Ba Che district, Quang Ninh province. The objective of this study was to identify the pathogenicity of Fusarium spp. isolated from infected-“Ba kich” plants growing in Ba Che. A total of 12 isolates were recovered from “Ba kich” in Ba Che district, Quang Ninh province. According to the morphological characteristics, pathogenicity assays, F. fujikuroi was proved to be the causal agent of root rot disease and was further confirmed by PCR with universal primer pair ITS4/ITS5 and phylogenetic analysis. Results on the biological characteristics of F. fujikuroi on different media and temperatures showed differences on mycelium growth and sporulation. The optimal condition were 25 o C, pH 5.5, PDA and BD media. Key words: F. fujikuroi, root rot, Medicinal Indian Mulberry, Morinda officinalis How. 1. ĐẶT VẤN ĐỀ * Nấm F. fujikuroi là một trong những loại nấm phát triển và gây hại chủ yếu ở các vùng nhiệt đới, á nhiệt đới và những vùng có nhiệt, ẩm độ cao. Trừ những vùng quá lạnh ra nấm cũng phát triển ở các vùng ôn đới (Booth, 1971). Trên thế giới, Nấm gây hại ở rất nhiều loại cây trồng trong đó chủ yếu là cây trồng thuộc họ hòa thảo. Tại Việt Nam, nấm F. fujikuroi đã phát sinh và gây hại nghiêm trọng tại các vùng trồng cây lương thực, cây công nghiệp và cây dược liệu. Bệnh 1. Viện Bảo vệ thực vật 2. Trường Đại Học Nông lâm - Đại học Thái Nguyên gây hại trên các bộ phận của cây như r , gốc, thân và hạt; làm cho các bộ phận này bị thối đen và biểu hiện triệu chứng vàng lá, cây thấp lùn, phát triển kém, đẻ nhánh kém, bị khô và d bị rụng. Nấm F. fujikuroi là một đối tượng gây hại quan trọng trên các cây trồng, nấm gây thối các bộ phận của cây làm giảm năng suất, chất lượng (Nguy n Thị Hồng Hạnh, 2012). Tại Trung Quốc, bệnh héo “Ba kích” cũng là một bệnh nguy hiểm gây triệu chứng héo trên cây “Ba kích” và đã được xác định là do nấm F. oxysporum Schlect. gây ra (Shi and Chi 1988; Luo and Chen 1989). Trong thời gian gần đây, các nghiên cứu về phổ ký chủ, đặc điểm sinh học, quy luật phát sinh Kết quả nghiên cứu khoa học BVTV - Sè 5/2018 69 gây hại và biện pháp phòng trừ bệnh vàng lá thối r do nấm F. fujikuroi gây ra đã được Viện Bảo vệ thực vật tiến hành. Bài báo này là một số kết quả nghiên cứu về nấm F. fujikuroi gây bệnh vàng lá thối r hại cây ba kích (Morinda officinalis How.) tại Quảng Ninh. 2. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu - Mẫu cây Ba kích tím có triệu chứng bệnh vàng lá thối r được thu thập tại các vùng trồng ba kích tại huyện Ba Chẽ và Hoành Bồ, tỉnh Quảng Ninh. - Môi trường phân lập gồm: Môi trường YMA, Bột Đậu (BĐ), PDA, Cà rốt (CR) và Czapek Dox. Các loại hóa chất phục vụ chiết suất DNA, chạy PCR và giải trình tự gen. 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu - Điều tra, thu thập và phân lập bệnh vàng lá thối r trên cây Ba kích tím theo phương pháp điều tra phát hiện bệnh cây của Viện Bảo vệ thực vật (1997). - Định danh nấm gây bệnh: Nấm gây bệnh vàng lá thối r sau khi được làm thuần bằng đỉnh sợi nấm. Cấy nấm thuần trên môi trường PDA trong 7 ngày. Lấy sợi nấm chiết xuất DNA tổng số bằng phương pháp CTAB (Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide) theo mô tả của Doyle & Doyle (1990). Phản ứng PCR được tiến hành với cặp primer ITS4 (5’-CCT CCG CTT ATT GAT ATG C-3’) và ITS5 (5’-GAA AGT AAA AGT CGT AAC AAG G-3’) (White và cs., 1990) khuếch đại vùng ITS của nấm. Sản phẩm PCR được tinh sạch từ agarose gel sử dụng QIAquick PCR Purifcation Kit (Qiagen, Đức) và được giải trình tự gen trực tiếp cả hai chiều bằng máy ABI3100 tại Hàn Quốc sử dụng BigDye Terminator 3.1 Kit (Applied Biotech). Trình tự các mẫu được so sánh với Ngân hàng Gen bằng phần mềm trực tuyến (Altschul et al. 1990). Cây phả hệ xây dựng theo phương pháp Neighbor-joining với khoảng cách di truyền giữa các chuỗi được xác định dựa trên mô hình thay thế Kimura hai tham số, giá trị thống kê bootstrap (%) với 1000 lần lặp lại trong phần mềm MEGA 7.0 (Kumar et al., 2016). - Lây bệnh nhân tạo bệnh vàng lá thối r theo chu trình Koch. Chọn cây ba kích 1 năm tuổi từ vườn ươm sinh trưởng tốt, không bị bệnh. Hòa dung dịch bào tử ở nồng độ 5 × 10 6 bào tử/ml tưới xung quanh gốc cây lây bệnh. Cây đối chứng không lây nhi m. Theo dõi biểu hiện triệu chứng bệnh trên cây thí nghiệm - Nghiên cứu khả năng phát triển của nấm F. fujikuroi trên các môi trường YMA, Bột Đậu (BĐ), PDA, Cà rốt (CR) và Czapek Dox ở các mức nhiệt độ 25, 30 và 35 o C. Các nguồn nấm F. fujikuroi trong nghiên cứu được làm thuần bằng đỉnh sinh trưởng của nấm. Theo dõi hình thái và màu sắc tản nấm, thời gian hình thành bào tử trên môi trường. 2.3 Thời gian và địa điểm nghiên cứu Thí nghiệm được tiến hành tại phòng thí nghiệm của Bộ môn Chẩn đoán, Giám định dịch hại và thiên địch, Viện Bảo vệ thực vật năm 2017. 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Triệu chứng bệnh vàng lá thối rễ hại cây Ba kích tím Triệu chứng điển hình ban đầu của cây bị bệnh lá ở phần gốc bị vàng, sau đó lan dần lên các lá phía trên, toàn bộ lá bị khô và rụng xuống, thân cây có màu đen và cây bị chết khô. Cây bị bệnh củ kém phát triển, r và thịt củ có màu nâu đen (hình 1A và 1B). Bào tử phân sinh có hai dạng: bào tử nhỏ và bào tử lớn. Bào tử nhỏ đơn bào thuôn dài hình elip, không màu, kích thước bào tử nhỏ 4,72×1,31µm. Bào tử lớn dài, hơi cong hình lưỡi liềm, đa bào kích thước bào tử lớn 10,56×1,58 µm hình 1C). Phân lập, làm thuần nấm và lây nhi m nhân tạo trên cây ba kích 1 năm tuổi, sau 45 ngày triệu chứng bệnh vàng lá bắt đầu xuất hiện và sau 60 ngày cây ba kích nhi m bệnh đã bị chết hoàn toàn tương tự như triệu chứng đã quan sát thấy trong tự nhiên (hình 1D). BVTV - Sè 5/2018 Kết quả nghiên cứu khoa học 70 Hình 1. Triệu bệnh vàng lá thối rễ hại cây Ba kích tím tại huyện Ba Chẽ, tỉnh Quảng Ninh 2017 (A) Triệu chứng bệnh trên cây, (B) Triệu chứng bệnh trên củ và r cây, (C) Cành bào tử và bảo tử nấm F. fujikuroi trên môi trường PDA, (D) cây biểu hiện bệnh sau lây nhi m 45 ngày. 3.2 Giám định nấm F. fujikuroi gây bệnh vàng lá thối rễ hại cây Ba kích tím bằng kỹ thuật PCR và phân tích cây phả hệ Nấm gây bệnh vàng lá thối r được phân lập, làm thuần. Bào tử nấm được chiết suất DNA tổng số làm mạch khuôn cho phản ứng PCR sử dụng cặp mồi chung ITS4/ITS5 để khuếch đại vùng ITS. Sản phẩm PCR tất cả các mẫu nấm có kích thước khoảng 570 bp. Giải trình tự hai chiều toàn bộ số mẫu thu được kết quả đồng nhất. Trình tự gen chủng nấm BKQN.2017 được chọn làm đại diện để BLAST so sánh trên Ngân hàng gen NCBI. Kết quả phân tích trình tự gen và xây dựng cây phả hệ đã ghi nhận chủng nấm được phân lập từ các bộ phận của cây Ba kích tím có triệu chứng bệnh vàng lá thối r tại Quảng Ninh (kí hiệu BKQN.2017) đã cùng với một đại diện của loài nấm Fusarium fujikuroi có mã số Ngân hàng Gen KT192406.1 tạo thành một nhánh riêng biệt so với các loài Fusarium khác trên cây phả hệ. Tổng hợp kết quả quan sát hình thái và phân tích trình tự gen cho thấy chủng nấm gây bệnh vàng lá thối r cây Ba kích tím tại huyện Ba Chẽ tỉnh Quảng Ninh là Fusarium fujikuroi (hình 2). Hình 2. Cây phả hệ đƣợc xây dựng theo phƣơng pháp Neighbor-Joining (Viện Bảo vệ thực vật, 2017). Trình tự gen của nấm gây bệnh vàng lá thối rễ Ba kích tím đƣợc ký hiệu BKQN.2017. Các mã số Ngân hàng gen đƣợc ghi trong ngoặc đơn Fusarium proliferatum (KJ767073.1) Fusarium oxysporum f. sp (KF534747.1). Fusarium oxysporum f. sp (KU097320.1). Fusarium equisetai (KY365254.1) Fusarium globosum (LT746278.1) Fusarium proliferatum (HQ332533.1) Gibberella moniliformis (EU364843.1) Fusarium sp (KX611638.1). Fusarium verticillioides ((KM434131.1) Fusarium fujikuroi (KT192406.1) BKQN.2017 0.001 Kết quả nghiên cứu khoa học BVTV - Sè 5/2018 71 3.3 Sự phát triển của nấm F. fujikuroi trên các loại môi trƣờng và nhiệt độ khác nhau 3.3.1. Sự phát triển của nấm F. fujikuroi trên các môi trường dinh dưỡng ở nhiệt độ 25 o C Ở điều kiện nhiệt độ 25 o C, nấm F. fujikuroi sinh trưởng và phát triển khác nhau trên các loại môi trường dinh dưỡng khác nhau. Sau 7 ngày nuôi cấy nấm phát triển tốt nhất trên các môi trường PDA, Cà rốt, Czapek Dox và YMA, kích thước tản nấm trung bình đạt 8,5±0,00 cm. Nấm sinh trưởng và phát triển kém trên môi trường bột đậu, sau 7 ngày kích thước tản nấm chỉ đạt 6,28±0,42 cm. Tuy nhiên, nấm lại có thời gian hình thành bào tử sớm nhất trên môi trường Bột đậu, PDA sau 1 ngày nuôi cấy. Trên môi trường Czapek Dox, YMA, Cà rốt nấm hình thành bào tử sau 3-4 ngày nuôi cấy. Đồng thời màu sắc của tản nấm cúng thay đổi tùy thuốc vào môi trường nuôi cấy, trên môi trường PDA, Bột đậu, Czapek Dox tản nấm có màu trắng, trên môi trường Cà rốt, YMA tản nấm có màu trắng hồng. Trên môi trường khác nhau kích thước bào tử cũng khác nhau. Kích thước bào tử lớn thay đổi từ 8,96×1,50-12,18×1,70 µm. Sau 7 ngày nuôi cấy kích thước bào tử lớn lớn nhất trên môi trường YMA (12,18×1,70 µm), kích thước bào tử lớn nhỏ nhất trên môi trường Bột đậu (8,96×1,50 µm). Kích thước bào tử nhỏ không có sự khác biệt lớn trên các loại môi trường dinh dưỡng, kích thước bào tủ nhỏ đạt trung bình từ 4,04×1,41-4,92×1,33 µm sau 7 ngày nuôi cấy (bảng 1) Bảng 1. Sự phát triển của nấm F. fujikuroi trên các loại môi trƣờng khác nhau ở nhiệt độ 25 o C (Viện Bảo vệ thực vật, 2017) Môi trường KTTN sau 7 ngày (cm) màu sắc tản nấm TGHT bào tử (ngày) Kích thước bào tử (µm) Bào tử lớn Bào tử nhỏ PDA 8,50±0,00 Trắng 1 11,62×1,86 4,76×1,74 Cà rốt 8,50±0,00 Trắng hồng 4 9,36×1,86 4,36×1,33 Bột đậu 6,28±0,42 Trắng 1 8,96×1,50 4,04×1,41 Czapek Dox 8,50±0,00 Trắng 3 12,10×1,65 4,92×1,33 YMA 8,50±0,00 Trắng hồng 3 12,18×1,70 4,68×1,33 Ghi chú: KTTN = kích thước tản nấm, TGHT = Thời gian hình thành 3.3.2. Sự phát triển của nấm F. fujikuroi trên các môi trường dinh dưỡng ở nhiệt độ 30 o C Ở nhiệt độ 30 o C, nấm phát triển kém hơn trên các môi trường, kích thước tản nấm sau 7 ngày đạt từ 2,42-5,82 cm. Nấm nuôi cấy trên môi trường Bột dậu sau 1 ngày hình thành bào tử, nấm nuôi cấy trên các môi trường PDA, Czapek Dox, YMA hình thành bao tử sau 3 ngày nuôi cấy, nguồn nấm nuôi cấy trên môi trường Cà rốt hình thành bào tử chậm nhất sau 4 ngày. Ở điều kiện 30 o C, màu sắc tản nấm trên Cà rốt, YMA thay đổi so với ở điều kiện 25 o C từ màu trắng hồng sang màu trắng xám. Trên môi trường PDA, Bột đậu, Czapek Dox nấm giữ màu trắng. Bào tử lớn của nấm nuôi cây trên môi trường Bọt đậu có kích thước lớn nhất là 12,1×1,65 µm nhưng lại có kích thước bào tử nhỏ nhỏ nhất (3,78×1,14 µm). Kích thước bào tử lớn của nấm trên các môi trường nuôi cấy có kích thước trùng bình từ 9,99×1,33-10,73×1,57. Bảng 2. Sự phát triển của nấm F. fujikuroi trên các loại môi trƣờng khác nhau ở 30 o C (Viện Bảo vệ thực vật, 2017) Môi trường KTTN sau 7 ngày (cm) màu sắc tản nấm TGHT bào tử (ngày) Kích thước bào tử (µm) Bào tử lớn Bào tử nhỏ PDA 4,98±0,28 Trắng 3 10,09×1,53 4,68×1,29 Cà rốt 3,32±0,35 Trắng xám 4 10,73×1,57 4,16×1,25 Bột đậu 2,42±0,27 Trắng 1 12,10×1,65 3,78×1,14 Czapek Dox 5,82±0,09 Trắng 3 9,99×1,33 4,04×1,29 YMA 5,12±0,03 Trắng xám 3 10,65×1,57 4,76×1,50 Ghi chú: KTTN = kích thước tản nấm, TGHT = Thời gian hình thành BVTV - Sè 5/2018 Kết quả nghiên cứu khoa học 72 3.3.3. Sự phát triển của nấm F. fujikuroi trên các môi trường dinh dưỡng ở nhiệt độ 35 o C Ở nhiệt độ 30 o C, nấm phát triển kém trên các môi trường, kích tước thản nấm chỉ đạt từ 1,1- 1,5 cm. Màu sắc của tản nấm có màu trắng trên môi trường PDA, Bột đậu, Czapek Dox và YMA, trên môi trường Cà rốt tản nấm có màu trắng vàng. Thời gian hình thành bào tử rút ngắn xuống chỉ còn 1 ngày trên môi trường Cà rốt, Bột đậu, Czapek Dox. Trên môi trường PDA và YMA kéo dài thời gian hình thành bào tử so với cùng điều kiện môi trường là 5 ngày (bảng 3, hình 3). Bảng 3. Sự phát triển của nấm F. fujikuroi trên các môi trƣờng dinh dƣỡng khác nhau ở 35 o C (Viện Bảo vệ thực vật, 2017) Môi trường KTTN sau 7 ngày (cm) màu sắc tản nấm TGHT bào tử (ngày) Kích thước bào tử (µm) Bào tử lớn Bào tử nhỏ PDA 1,50±0,10 Trắng 5 10,65×1,94 5,28×1,49 Cà rốt 1,30±0,02 Trắng vàng 1 7,18×1,82 3,71×1,38 Bột đậu 1,40±0,10 Trắng 1 18,32×3,79 5,32×2,26 Czapek Dox 1,10±0,09 Trắng 1 12,34×2,06 4,52×1,38 YMA 1,30±0,06 Trắng 5 10,81×1,74 5,01×1,57 Ghi chú: KTTN = kích thước tản nấm, TGHT = Thời gian hình thành Kích thước bào tử lớn và bào tử nhỏ cúng có sự chênh lệch đáng kể, kich thước bào tử lớn từ 7,18×1,82- 18,32×3,79 µm, kích thước bào tử nhỏ từ 3,71×1,38-5,32×2,26. Kích thước của bào lớn và bào tử nhỏ đạt lớn nhất trên môi trường Bột đậu với kích thước lần lượt là 18,32×3,79 µm và 5,32×2,26 µm. Hình 3. Sự phát triển của nấm F. fujikuroi trên các loại môi trƣờng dinh dƣỡng khác nhau ở các điều kiện nhiệt độ khác nhau: (1) Ở nhiệt độ 25 o C, (2) ở nhiệt độ 30 o C và (3) ở nhiệt độ 35 o C. 4. KẾT LUẬN - Nấm Fusarium fujikuroi là tác nhân gây bệnh vàng lá thối r trên cây Ba kích tím tại Quảng Ninh. - Ở điều kiện nhiệt độ 25 o C nấm F. fujikuroi phát triển tốt nhất trên các loại môi trường, nấm phát triển mạnh nhất trên môi trường PDA. Thời gian hình thành bào tử trên môi trường PDA và bột đậu là sớm nhất sau 1 ngày nuôi cấy. - Ở điều kiện từ 30 o C trở lên nấm có tốc độ phát triển kém hơn trên cấc môi trường, nhưng lại có thời gia hình thành bào tử sớm nhất sau 1 ngày nuôi cấy trên môi trường Cà rốt, Bột đậu, Czapek Dox. Ở nhiệt độ 35 o C, bào tử lớn và bào tử nhỏ có kích thước lớn nhất trên môi trường Bột đậu. Lời cảm ơn Công trình này là một phần kết quả của đề tài cấp tỉnh Quảng Ninh Nghiên cứu các giải pháp khoa học và công nghệ quản lý tổng hợp sâu, bệnh hại chính trên cây Ba kích tím và Giảo cổ lam tại tỉnh Quảng Ninh do TS. Trịnh Xuân Hoạt (Viện Bảo vệ thực vật) làm chủ trì. TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Nguy n Thị Hồng Hạnh, 2012. “Nghiên cứu nấm Fusarium fujikuroi trên hạt lúa”. Luận văn thạc sĩ Nông nghiệp. Học Viện Nông nghiệp Việt Nam. 2. Viện Bảo vệ thực vât, 1997. Phương pháp Kết quả nghiên cứu khoa học BVTV - Sè 5/2018 73 nghiên cứu bảo vệ thực vật tập 1. Nxb Nông nghiệp Hà Nội. tr 46-57. 3. Altschul S.F., Gish W., Miller W., Myers E.W., Lipman D.J., 1990. Basic local alignment search tool. J Mol Biol 215:403-410. 4. Booth C., 1971. The Genus Fusarium. Commonwealth Mycological Institute, Eastern Press Limited, Kew Surrey. 5. Doyle J.J. and Doyle J.L.,1990. Isolation of plant DNA from fresh tissue. Focus 12:13-15. 6. Kumar S., Stecher G., Tamura K., 2016. MEGA7: Molecular Evolutionary Genetics Analysis Version 7.0 for Bigger Datasets. Mol Biol Evol 33(7):1870-1874. 7. Luo S., Chen Z., 1989. Study on the Fusarium wilt disease of medicinal Indian mulberry. Journal of Fujian Agricultural College 18(4):526-531. 8. Shi X. and Chi P., 1988. Identification of the pathogen causing wilt disease of the medicinal herb Indian mulberry (Morinda officinalis How.). Acta Phytopathologica Sinica 18(3):137-142. 9. White T.J., Burns T., Lee S. and Taylor J.W., 1990. Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics. In: Innis MA, Gelfald DH, Sninsky JJ and White TJ (eds) PCR Protocol: A Guide to Methods and Applications (pp. 315-322) Academic press, New York, USA. Phản biện: TS. Hà Minh Thanh NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA NẤM Botrytis cinerea Pers. GÂY BỆNH THỐI XÁM TRÊN THƢỢC DƢƠC, CÀ CHUA VÀ LẠC TẠI ĐỒNG BẰNG SÔNG HỒNG Study on Biological Characteristics of Botrytis cinerea Pers. Causing Gray Mold Disease on Dahlia, Tomato and Groundnut in Red River Delta Mai Văn Quân 1 , Trịnh Xuân Hoạt 1 , Đặng Vũ Thị Thanh 2 , Lê Quang Mẫn 1 , Ngô Quang Huy 1 Ngày nhận bài: 08.08.2018 Ngày chấp nhận: 27.08.2018 Abstract Botrytis cinerea is an important pathogen that causes gray mold disease in different crop in Viet Nam. In present study, a total of 15 isolates were isolated from tomato (Solanum lycopersicum L.), dahlia (Dahia pinnata Cav.), groundnut (Arachis hypogae L.) in the Red River delta. The morphological characteristics were based on characters such as conidiophore and conidial length; and the results indicated that all isolates belonged to Botrytis cinerea. PCR with universal primer pair ITS4/ITS5 amplified DNA fragments of about 700 bp from all isolates. The DNA sequencing and phylogenetic analysis based on ITS confirmed that B. cinerea is the causal agent of gray mold disease on crop. The effect of various culture conditions on mycelium growth, sporulation, sclerotia formation of B. cinerea was performed. CR is an oftimal medium for production of mycelium, spores and sclerotia. The growth of mycelium cultured on CR as the fastest with the production of mycelium, fungal spores and sclerotia. The optimal conditions for mycelium growth and sporulation of B. cinerea isolated from dahlia was 15-20 o C on PDA medium. The optimal conditions for mycelium growth was the 12:12 (CL:D) cycles of 12 hours light and 12 hours darkness; and the continous darkness was optimum condition for sporulation. Keywords: B. cinerea, gray mould disease, biological characteristic and molecular identification 1. Viện Bảo vệ thực vật, 2. Hội KHKT Bảo vệ thực vật Việt Nam